紫花苜蓿高频体细胞胚与次生胚再生体系的建立.pdfVIP

维普资讯 第 4O卷 第 4期 南 开 大 学 学 报(自然科学版) Vo1．40 No_4 2007年 8月 ActaScientiarum Naturalium UniversitatisNankaiensis Aug．2007 文章编号 ：0465—7942(2007)04—0001—06 紫花苜蓿高频体细胞胚与次生胚再生体系的建立 孙艳香 ，杨红梅 ，尹 军，朱晔荣，王宁宁，王 勇1,3 (1．南开大学 生命科学学院，天津 300071；2．廊坊师范学院 生物系，河北 廊坊 065001； 3．天津市农业生物技术研究中心，天津 300192) 摘要：通过系统地对紫花苜蓿体细胞胚发生 以及次生胚发生途径 中若干影响因子 的比较研究 ，建立了紫花 苜蓿高频体细胞胚和次生胚再生体系．结果表 明，体细胞胚再生体系及次生胚再生体系均具有严格 的基 因型依 赖性 ，不同的品种间以及 同一品种内的不 同株系间再生频率存在较大差别 ；MSO培养基可作为胚状体成苗培养 基 ，但次生胚在 MSO培养基中成苗率较低而再次形成新 的胚状体 ；改 良无激素 SH培养基可有效终止次生胚 的 发生 ，并诱导次生胚成苗．此外，从 6个紫花苜蓿品种中筛选到3个具有较强胚状体再生能力的品种 ，6个高胚状 体发生能力的株系，2个具有较强的次生胚发生能力的株系，为进一步的遗传转化奠定了基础． 关键词 ：紫花苜蓿 ；胚状体 ；次生胚 ；高频再生体系 中图分类号 ：Q78 文献标识码 ：A 0 引 言 作为常规育种手段 的补充 ，组织培养已成为紫花苜蓿扩繁 、人工种子繁殖、缩短育种周期以及进行遗 传转化的基础技术．自1972年 Saunders_1等人从苜蓿未成熟的花药 、子房、子叶愈伤组织再生植株获得成 功以来 ，苜蓿组织培养研究工作从未间断．目前 ，进行紫花苜蓿再生主要是通过胚状体发生途径．研究表 明，胚状体发生与基因型有很大关系 ，有些品种再生较难，而有些品种则较易再生_2]，曾经也有高频再生 株系的报道_5~7]．1983年dosSantos还描述了紫花苜蓿 中次生胚发生现象∞；Parrott和 Bailey随后获得 了具有高次生胚发生能力的基因型并提出其可作为新 的遗传转化系统和人工种子生产技术 ]．国内对苜 蓿胚状体形成过程中次生胚发生的现象也屡有报道_5’如]．但是该技术并未得到广泛应用，目前尚缺乏系统 性研究资料．因此 ，我们 以6种国内主栽紫花苜蓿品种为研究对象，经过细心反复筛选 ，得到了6个高频再 生株系和 2个次生胚再生株系，进而研究了不同因子对体细胞胚和次生胚发生和成苗的影响，为通过诱导 胚状体发生及次生胚发生途径进行紫花苜蓿的遗传转化奠定了基础． 1 材料与方法 1．1 材料 实验于 2003--2004年在南开大学植物生理与分子生物学实验室进行．供试 品种为中苜一号(Zhong— muNo．1)，保丰苜蓿 (Baofengalfalfa)，友谊 (Youyi)，WL323，艾菲尼特 (Aifeinite)，朝 阳(Zhaoyang)．其 中，前 四个品种来源于中国农业科学院畜牧研究所，其余品种来源于天津市畜牧局． 1．2 方法 1．2．1种子的消毒及无菌苗的获得：按常规方法进行种子的消毒和无菌苗的培养．取 5～10d苗龄的无菌 苗用于各实验处理．培养环境光周期为 16h，光照强度 3000lx，昼夜温度为 25℃／18℃(以下同)． 1．2．2胚性愈伤的诱导和胚状体 的产生 ：(1)培养基对胚性愈伤和胚状体诱导的影响为确立最佳胚性愈 收稿 日期 ：2006—0620 作者简蓄介界：孙艳香喜裔(19雌70--)，女，搿河蠢北廊坊嘉人，博士，副副(00教教2授授122，，0主主1要要1-6从从)事植物遗传育种与分子生物学冤 维普资讯 · 2 · 南 开 大 学 学 报 (自然科学版) 第 4