动物线粒体DNA 提取的原理与方法.pdfVIP

维普资讯 蚕 学 通 讯 第 22卷 第 3期 NewsletterofSeticuhuralScience 2002年 9月 动物线粒体 DNA提取 的原理和方法 夏玉玲 刘彦群 鲁 成” (西南农业大学蚕学与生物技术学院 农业部蚕桑学重点实验室 重庆 4OO716) 摘 要 从动物线粒体 的特征、线粒体 的鉴定方法、提取线粒体 DNA各步骤等原理 出发 ，比较 了 目前常用的几种提取线粒体 DNA的方法 ，提 出动物线粒体 DNA提取 的几点关键步骤 ，并提 出一套 优化的操作流程。 关键词 线粒体 线粒体 DNA 提取方法 线粒体是存在于绝大多数真核细胞 内的一种基本 的重要 的细胞器 。它是细胞进行氧化磷 酸化的场所 。线粒体基因组不仅是研究 DNA结构与复制转录的良好模型 ，也是研究真核细胞 核酸与蛋 白质合成非常合适的模型系统。线粒体基 因组与核基因组的同源基因结构对 比也被 广泛应用于核基 因和核外基 因的进化研究中。由于线粒体基 因在真核生物具有高保守性 ，所 以它 已成为 了研究物种进化 的一种常用 的标记 ，并为线粒体起源提供有价值 的线索…1。 动物线粒体 DNA具有分子量小、结构简单 、母性遗传和进化速度快等特点 ，已广泛应用于 动物群体遗传学和进化生物学等领域 的研究 【。进行动物线粒体 DNA方面意义重大 ，现将线 粒体 DNA的提取 的原理和方法介绍如下 ： 1 提取动物线粒体 DNA的原理 1．1 线粒体 的特征 线粒体是 由内外两层膜组成 ，外膜光滑 ，内膜 向内回旋折叠，形成许多横隔。线粒体 中含 有多种氧化酶 ，在此进行 TCA循环、呼吸连 电子传递和氧化磷酸化等产能作用 ，并传递和储存 所产生 的能量 ，是细胞 的动力工厂和生物氧化 的主要场所 。线粒体 的形状 、大小、数 目和组成 ， 在不 同生物 、不 同组织 以及生活于不 同条件下 的细胞 中变化很大。线粒体 的外型呈多样化 ，绝 大多数类型细胞呈圆形、卵原形 ，也有呈杆状的。其体积大小不等，一般直径 比较一致，为 0．5 ～ 1．0tan，长度为 1～5tan，最长可达到 7tan。线粒体的数 目与生物种类 、组织、细胞类型和细胞 生理功能变化有关 。锥虫和有 的真菌只有一个线粒体 ，大多数动物 的肝脏细胞含有上千个线 粒体 ，生殖细胞如卵母细胞可达到 30万个线粒体 ，家蚕 的每个后部丝腺细胞 只有 2～4个线粒 体u引，而有 的细胞根本没有线粒体 ；在细胞生命活动旺盛时，它 的数量多，在衰老时，数量少 ， 有 时可能消失 ；新生细胞 比衰老细胞或病变细胞 的线粒体 多 。 线粒体的主要成分是蛋 白质 (占干重 60～65％)和脂类 (占干重 35～4o％)。此外还有少 量的核酸 (主要为 DNA和 RNA)、金属离子、阴离子和维生素等。其 中线粒体膜主要成分是蛋 白质、脂类和一些酶 ，基质 由各种酶、DNA、RNA、金属离子、阴离子和维生素等组成 。mtDNA不 · 国家 自然科学基金项 目资助 (项 目编号 ··通讯作者 维普资讯 3期 夏玉玲等 ：动物线粒体 DNA提取 的原理和方法 与组蛋 白相结合 ，它们排列紧密 ，而象细菌体那样形成为环状裸露 的双链 DNA。 不 同物种 的线粒体基 因组 DNA大小悬殊 。一般植物 的线粒体基 因组 DNA较大 ，其分子 大小范 围为 ：186—2400kb；原生动物线粒体基 因组 DNA为 18．5。55kb；真菌 的线粒体基 因组 DNA大小在 17．6—115kb之 间；动物线粒体基 因组 DNA较小 ，约为 15．7。19．5kb。 线粒体在功能上受核制约 ，mtDNA的复制 、转 录和翻译过程离不开核基 因组 的指导 与调 控 。但它有一套 自主装置 的基本成分 ，如 DNA聚合酶、RNA、RNA聚合酶、tRNA、核糖体核氨基 酸活化酶等 ，所 以 mtDNA不仅能进行 自我复制