USPIO标记大鼠C6脑胶质瘤细胞的示踪研究.pdfVIP

0．25％胰蛋白酶，胎牛血清。 ， 2．主要设备：co。培养箱(Thermo公司)，净化工作台(苏州生化净化设备厂)，透射 电镜(Philip公司)，1。5T磁共振仪(GE公司，SIGNA机型)。 二、试验方法 1．纳米磁性材料的制备与修饰：由上海交通大学纳米科学技术研究所提供，采用共沉淀 nm。用95％的乙醇洗涤 法制备Fe。0a纳米颗，经透射电镜(TME，Philip)测定其直径约lo一20 在60。C水浴中搅拌反应3小时。然后用离子水洗涤至中性，取适量氨基硅烷纳米颗粒分散在 EMEM培养液(Eagle公司)中，经超声分散后室温保存。 2．细胞标记方法：(1)细胞培养及标记技术：将c6细胞分装于4个10ml培养皿中， 加入适量的含有10％d、牛血清的RPMI一1640培养液，置于37℃、5％的co。培养箱中培养。每 24—48 h换1次培养液，换液时保留部分旧液，待细胞生长至皿底I／2时于4个培养皿内分 别加入USPIOl2．5 h。(2)标记 ug，25．0ug，50．0ug和i00．0ug，同等条件下再培养12 细胞分组：各培养皿分别加入0．25％胰蛋白酶适量消化，弃去消化液，用PBS洗3次，细胞 m1 ml 计数。各组分别取1×106、2×i06、1×i0‘个细胞置于1．5 Eppendorf管中，加入1 溶解的1％琼脂糖溶液混匀，冷却，另取一管加入等量的蒸馏水作为对照进行MRI检查。(3) 普鲁士蓝铁染色方法：4％戊二醛固定10分钟，Tris液洗涤，放入Pearl’S液中30min，蒸 馏水洗涤，放入1％中性红溶液中复染15S，水洗，透明，固定，显微镜下观察。 3．评断标准：铁染色阳性细胞显示为胞浆内含蓝染颗粒，根据含蓝染颗粒细胞数量的多 少和染色强度评价细胞嗜铁的程度：A0对照组为阴性；A25组为弱阳性；A50组为阳性；A100 组为强阳性；随SPIO浓度的增加，铁染色加强。 三、标记细胞群的体外成像 1．5 采用GE公司的SIGNA T磁共振成像系统，眼线圈，轴位和冠状位扫描，成像序列 SE 350／17 3000／105 TIWI(TR／TEms)，FSET2WI(TR／TE mS)，FGR／30。(TR／TE225／5．3)， mm×192 视野(FOV)8．0mm，层厚1．8mm，矩阵256 mm。 测量信号强度，感兴趣区(ROI) 为4mm2。 十 结 果 瘤细胞和对照组的培养液进行矢状成像。各信号强度测量。在相同的细胞数量时，随着SPIO 浓度的升高，细胞成像的信号逐渐降低，以FSET2WI和FGREl5序列明显。在相同的SPIO浓 度时，随着细胞数量的增多，细胞成像的信号也随之降低(图)。 2．镜下观察：培养12 h大鼠c6胶质瘤细胞吞噬USPIO主要集中在胞浆内，USPIO浓度 越高含蓝染颗粒的细胞越多，染色越深。 讨 论’ 1．MR分子探针的开发：在分子影像学中最重要的的部分是分子探针，有了分子探针和 相关的影像设备后就能够进行分子成像。众所周知MRI在空间和时间分辨率明显优于PET，但 是检测灵敏度却不如PET，所以MRl分子探针强调磁敏感性这一关键。MR探针必须具备以下 性能，(1)必须含有能与被检物发生特异性结合的分子，长度一般从15bp至数千bp。(2) 必须带有能追踪是否与被检物发生反应的磁敏感性金属离子。随着对这一新型材料的化学、 机械、电子、磁学及光学性能的进