聚乙烯吡咯烷酮制作鱼类透明骨骼标本的研究.pdfVIP

中国科技论文在线 聚乙烯吡咯烷酮制作鱼类透明骨骼标本的研究* 董代辉，唐安科 重庆师范大学重庆市动物生物学重点实验室，重庆（400047 ） E-mail ：ddh915827@163.com 摘 要：本研究在传统透明骨骼标本制作方法基础上进行了系列的尝试与改进，并形成了一 种新型的透明骨骼标本的制作方法。本方法较传统的丙三醇法而言，有以下优点：将标本经 过非离子型高分子化合物聚乙烯吡咯烷酮（PVP ）处理后，制成的透明骨骼标本无需浸泡 在丙三醇中保存，且具防霉防虫的特点。 关键字：透明骨骼标本；PVP；制作方法 0 前言 透明动物骨骼标本制作原理是应用化学试剂作用于标本材料，使其肌肉组织曲光率与 透明剂相近而达到透明，然后经过标本整体染色、肌肉褪色过程，致使骨骼和肌肉界限分明， 从而突显出所要观察的骨骼系统[1] 。透明骨骼标本清晰美观而且立体感强，不仅可作为教学、 科研材料所用，还可用于科学普及交流展览等。传统的透明骨骼标本制作方法主要是甘油法， 制作好的标本必须长期保存在甘油中，且由于染料的逐渐退色而导致保存液逐渐变黄，需定 期更换保存液，故对标本的长期保存与管理工作带来诸多不便。鉴于此，本研究为获得效果 好且更易于保存的透明骨骼标本，选用非离子型高分子化合物聚乙烯吡咯烷酮（PVP ）作 为主要的标本塑化药品，进行了新的尝试性研究。 1 材料、药品与仪器 1.1 材料 幼龄鲫鱼(长度 5-8cm) 1.2 药品与试剂 KOH ，茜素红，丙三醇，75%酒精，95%酒精，聚乙烯吡咯烷酮（PVP ）， 聚乙二醇 （PEG ），蒸馏水 1.3 仪器与工具 强制对流干燥箱、天平、解剖刀、手术剪、镊子、玻璃棒、烧杯、标本瓶、塑料盒。 2 制作方法 2.1 标本材料的前期处理 首先将选好的材料标本鱼除去鳞片、鳃和眼球，并在其腹部切一小口去除内脏器官，同 时剥离掉其体腔内壁上的黑色体腔膜，以免影响所制标本的透明度；然后使用注射器在眼眶 处伸入颅腔中将脑组织液抽吸掉（注：小型鱼类可越过此步骤）；最后用清水将标本表面的 血液等污物冲洗干净待处理。 2.2 固定 将上述处理好的鱼标本进行固定：首先用吸水纸将标本表面的水吸干，即可浸入浓度为 *本课题得到重庆市教委基金项目(No.0833181)和重庆师范大学基金(No.08x1z001)项目联合资助。 -1- 中国科技论文在线 75%的酒精中固定 1—2 天，然后转入 95%的酒精中继续固定 1—2 天。 2.3 透明 将固定好的鱼标本先置于3%的氢氧化钾溶液中进行透明。由于标本的背部肌肉较厚， 可先于背脊处注射4—5% 的氢氧化钾溶液[2] 。透明时间可根据标本的大小、剥皮与否而定， 以能在肌肉较厚的部位隐约观察到骨骼为宜。 2.4 染色 将透明后的标本先用清水漂洗，再置于染色液（0.02g 茜素红，2g KOH ，200ml 蒸馏水）中进行染色，使茜素红附着于骨骼。染色程度以可见到骨组织染成紫红 色为宜。 2.5 褪色 褪色即是将染色后的标本的肌肉部分的颜色去除，保留骨骼上的颜色。由于在染色过程 中，肌肉与骨骼同时被着色，为了使骨骼与肌肉界限分明，需脱掉肌肉上的颜色。首先将染 色后的标本用清水洗去表面的染液，然后浸入褪色液Ⅰ（60ml 丙三醇、2g KOH 、140ml 蒸 馏水）中 1—2 天后取出，最后将标本置于褪色液Ⅱ（100ml 丙三醇、2g KOH、100ml 蒸馏 [3] 水）中 3—5 天。直到肌肉透明，突显出骨骼系统即可 。 2.6 塑化 将上述处理后的标本进行 PVP 溶液的塑化：以 0.5%的KOH 溶液作为母液，分别配制 浓度为 25 ％与50 ％的PVP 溶液，然后将标本置于不同浓度的 PVP 溶液中逐级进行浸泡。 一般而言，每级浸泡时间约 5—7 天