GCRG224在大肠杆菌中的表达和重组蛋白纯化.pdfVIP

维普资讯 军 医 进 修 学 院 学 报 2007Jun A ． 28(3) · 161 · cadJPLA PostgradMedSch … ’ GCRG224在大肠杆菌中的表达及重组蛋 白纯化 伍银桥，王刚石，王孟薇，吴本俨，尤纬缔，王卫华 (解放军总医院南楼消化科，北京 100853) [摘要] 目的：利用硫氧还蛋白融合表达系统表达胃癌相关基因GCRG224，制备高纯度的GCRG224蛋 白。 方法 ：采用PCR技术从pGEM．T质粒上扩增出含完整ORF的GCRG224eDNA序列，将其克隆至硫氧还蛋白融合表 达载体pET102／D-TOPO中，转化大肠杆菌 BL21，经IPTG诱导表达融合蛋白，凝胶回收目的蛋白。结果：SDS—PAGE 证实在大肠杆菌中高效表达出相对分子量约 16．8ku的Thioredoxin／GCRG224融合蛋白。薄层凝胶扫描显示 ，其表 达量 占菌体总蛋白质的22．3％。经凝胶回收法得到纯度近 100％的蛋白产品。结论：在大肠杆菌中成功表达Thi— oredoxin／GCRG224融合蛋白，并制备了高纯度的蛋白产品，为后续功能研究及其抗体研制创造了条件。 [关键词]胃肿瘤；GCRG224；癌基因蛋白质类，融合 ；原核细胞 ；基因表达；纯化 [中图分类号]R735．2 [文献标识码]A [文章编号]1005—1139(2007)03-0161-03 Expressionofgastriccancerrelated geneGCRG224 in ．colias wellas purificationof recombinantprotein WUYin—qiao，WANGGang—s ，WANGMeng-wei， Ben—yah，YOUWei—di，WANGWei—hua(Departmentof Gastroenterology，NanlouofPLAGeneralHospital，Beng100853，China) [ABSTRACT] Objective：ToexpressgastriccancerrelatedgeneGCRG224usingthioredoxinfusionexpressionsystemand preparehumna GCRG224fusionprotein．Methods：GCRG224 cDNA withcompleteopen readingframeWas ma plifiedbyPCR from plasmidpGEM-T．nadhtenWas clonedintothioredoxinfusionexpressionvectorpET102／D—T0P0．Therceombinnatplas— midWasfurthertrnasofrmedintoE coliBL21strain．AfterinductionwitllIPTG．htetllioredoxin／GCRG224fusionproteinWas xe— pressedinE coli．Th eproductWas obtainedbym~9．nsofdircetpurificationfrom adenaturingpe lyaerylamidege1．Results：SDS— PAGEna alysisshowde tlletlliordeoxin／GCRG224fusionproteinwitllrelativemoleculemassof16．8kuWas overexpressed．Th e htinlayergelscnaninganalysisshowedhtathteyiddofGCRG224fusionproteinWas 22．3％ ofhtetotalbacterial protein．Th e productWas obtained wiht apurity ofabou