大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2片段的聚合现象的研究.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’() * ! +( *# 年 月 $%%$ !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 ,-). $%%$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒!#$ 片段的聚合现象研究 李少伟 张 军 何志强 葛胜祥 顾 颖 林 鉴 刘如石 夏宁邵 （厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室 厦门 B2!%%3 ） 摘 要 在大肠杆菌中表达了戊型肝炎病毒（ ） 的 片段，得到的重组蛋白 在 C8’ DE5$ 6 * 6 * B4# F 6 * 6 * 2%# +8$ GHG/ IJK8 中主要以可被尿素解聚的二聚体形式存在，二聚体对病人血清的反应性明显强于单体；质谱分析表明+8$ 可 形成从二聚体到至少六聚体的多种聚体；动态光散射测定表明平均分子半径约#;9，相当于四聚体，但分散度较 大，提示为多种大小不一的聚合体的混合物。这些证据表明+8$ 蛋白可形成以同源二聚体为基本单位的多种聚合 体形式，其中以二聚体间的结合最为紧密，并且以二聚体为基础可进一步装配出多种更高级结构，从而具有作为 C8’ 疫苗及诊断试剂抗原的良好前景。 关键词 戊型肝炎病毒， ，组装，二聚体，原核表达 DE5$ 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） L4B4 M# J !%%%/B%2! $%%$ %#/%#2B/%3 戊型肝炎是发展中国家的一种主要急性散发型 是否依然形成二聚体，并是否可在二聚体基础上模 肝炎，其病原体戊型肝炎病毒（ ）主要经消化道 拟病毒子粒的装配过程形成更高级的聚体形式乃至 C8’ 传播，是大小约 $ F B#;9 的单股正链无包膜的 类病毒颗粒，本研究将该区段转移至一个非融合表 病毒，基因组全长约 ，含 个开放读码框 达载体 中，表达出无融合蛋白的 多肽，并 E+J M3NO B Q0D/0 8$ 架（ ），其中 编码 个氨基酸的多肽 从多个方面对该重组多肽的聚合现象进行了探讨。 DE5 DE5$ 22% （ ），为病毒主要结构蛋白。目前已有几个研 IDE5$ % 材料与方法 究小组利用昆虫杆状病毒表达系统表达了 端部 + 分缺失的 片段，并发现当表达片段的 端被 % % 质粒与菌种 IDI5$ P 昆虫细胞内蛋白酶剪切至6 * 6 * 2% 的产物能够形成 含有C8’ DE5$ 6 * 6 * B4# F 6 * 6 * 2%# 基因片段的 ［ ］ 类病毒颗粒! F 3 。在过去的研究中，我们利用谷胱 质粒 （ ）为香港大学微生物系吴文 QK8R $%0/8$ QK8$