烟草曲茎病毒复制蛋白基因的原核表达与免疫定位.pdfVIP

卷 期 !! 微 生 物 学 报 ’( )!! 0’ ) 年 月 #$$! %# !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,+-.+/ #$$! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 烟草曲茎病毒复制蛋白基因的原核表达和免疫定位 崔晓峰 李云琴 李桂新 周雪平 （浙江大学生物技术研究所 杭州 1%$$#7 ） 摘 要：利用 方法从烟草曲茎病毒（ ） 分离物的病株中获得复制蛋白（ ）基因，将其克隆到原核表 HIJ 5.IK L13 J+M 达载体 上获得重组质粒 。重组质粒导入大肠杆菌 （ ） 中， 诱导表达后发 MN;O6!56% MN;O6L13J+M PQ#% *;1 MQGR K SH5N 现部分J+M 融合蛋白以可溶性形式表达。利用NK56K+M9/’R+ !P 亲和层析柱纯化了J+M 的融合蛋白，免疫家兔获得 蛋白的抗体。对 侵染烟草中 蛋白的亚细胞分布研究发现， 蛋白主要分布于含有细胞核的组份 J+M 5.IK J+M J+M 中。利用免疫胶体金技术对感病烟草中J+M 蛋白进行了定位，发现J+M 蛋白存在于细胞核内。 关键词：烟草曲茎病毒，复制蛋白，表达，定位 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） T23 U $$$%6#$7 #$$! $6$2!36$! 双生病毒是世界范围内广泛发生的一类具有孪 ［］ ! 材料和方法 生颗粒形态的植物单链 % *0U 病毒 。近年来，这类 病毒特别是烟粉虱（ ）传播的菜豆金色 ! ! 毒源 !#$%$ ’()$ 花叶病毒属（ ）病毒已在多个国家和地区 5.IK L13 分离物采自云南保山地区田间发病 !*+#+,$-.% ［］ 的作物上造成严重危害# 。大多 !*+#+,$-.% 属病 的烟草，病株表现植株矮化、茎杆顶部扭曲等症状。 毒包含*0U6U 和*0U6P # 个组份。一些!*+#+,$-/ !# 菌株、质粒和试剂 大肠杆菌（ ） 由本实验室保 属病毒，如胜红蓟黄脉病毒（ ;%)8-$)8$ )+2$ *X3 .% 0*-’.# 122+3 ,$4 存， 、 亲和层析柱和 ， ）、木尔坦棉花曲叶病毒（ MN;O6!56% NK56K+M9/’R+ !P NK5 ,$-.% UL 5+’’+4 26 ).-2