转人溶菌酶基因奶牛多重PCR快速检测方法建立.pdfVIP

·40 · 生物技术 中国畜牧兽医 　20 10 年第 37 卷第 6 期 转人溶菌酶基因奶牛多重 PCR 快速检测方法的建立 1 1 1 1 1 2 3 朱振营 ,林祥梅 ,刘建 ,吴绍强 ,仇松寅 ,王建武 ,薛振华 ( 1. 中国检验检疫科学研究院 动植物检疫研究所 ,北京 　100029 ; 2 . 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室 ,北京 　100 193 ; 3 . 北京市畜牧兽医总站 ,北京 　100 107) 摘要 :建立转基因奶牛多重 PCR 快速检测方法 ,为转基因动物及产品进出境检测技术平台的建立提供技术支持 ,并为转 基因动物及产品检测技术标准的制定提供参考 。根据牛物种特异性基因线粒体 DNA (mitochondrial DNA ,mtDN A) 设计奶牛 ( ) ( ) 内源性基因引物 ,根据外源基因人溶菌酶基因 human ly sozyme ,hL Y 及标记基因新霉素磷酸转移酶基因 N P T Ⅱ设计特异 性引物 ,优化反应条件 ,建立转基因奶牛多重 PCR 检测方法 。结果表明 ,建立的方法灵敏 、快速 、特异 ,一个反应可以检测多个 基因片段 ,可有效用于转基因奶牛外源基因的检测 。 关键词 :转基因;多重 PCR ;hL Y 中图分类号 :Q78 　　　　　文献标识码 :A 　　　　　文章编号 :167 17236 (20 10) 　　转基因动物是指用基因工程的方法将外源基因 畜的检测平台尚待建立 。本研究以通过体细胞核移 稳定整合到自身染色体并稳定遗传的一类动物 。自 植技术制作的转人溶菌酶基因的奶牛为研究对象 , ( ) 针对内源基因 m tD N A 、外源基因 hL Y 和标记基因 Palmit er 等 1982 将大鼠生长激素基因导入小鼠受 精卵中获得转基因“超级鼠”以来 ,转基因动物已成 N P T Ⅱ建立了多重 PCR 检测方法 , 旨在对中国出 为生命科学发展中的热门领域 。体细胞克隆羊 多 入境检验提供技术支持 ,为转基因标识制度在转基 ( ) 因动物及其产品中的顺利实施提供借鉴 。 莉诞生后 Wilmut 等 ,1997 ,转基因家畜的研究取 得较大进展 , 目前用于生产药用或食用蛋白、改善营 1 　材料与方法 1 . 1 　试验材料 　本研究所用转人溶菌酶基因奶牛 ( ) ( 养 、增强抗病力的转基因猪 L ai 等 ,2006 、牛 Ku 基因组由中国农业大学农业生物技术国家重点实验 roiwa 等 ,2009 ; Yan g 等 ,2008 ; Wang 等 ,2008) 、羊 室保存 。 ( Schnieke 等 ,1997) 已被研制成功 ,其潜在的经济效 1 . 2 　试剂 　T aq DN A 聚合酶 、