通过中国仓鼠一小鼠体细胞杂交降低小鼠癌细胞SCE频率.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing 6 1（);39-421984 通过中国仓鼠一小鼠体细胞杂交 降低小鼠癌细胞的SCE频率／ 颜永杉 习霞辉 钱 进 （中国科学院遗传研究所，北京） 姐妹染色单体互换 (SCE）反映了正在进 液洗涤后加人 Iml预热 3（70C）的聚乙二醇 行复制的染色体同位点上 DNA分子之间交换 (PEG)，在37℃处理 1分钟。然后，再加人l0m1 的频率。一般来说，生物体或培养的细胞周围 164。培养基，通过离心洗涤细胞两次，将融合 环境的微量有毒物质或致癌因素 （包括物理、化 细胞分散培养在6个小培养瓶里。让融合细胞 学和生物因素）可明显地提高 SCE频率，例如 在含10多小牛血清的1640培养基里生长24 丝裂霉素可使人细胞的SCE频率提高到 100 小时 3（70C)，然后将培养基改为选择性培养基 SCE／细胞，但此时仅有很少数的染色畸变发 HAT1131，并让细胞在静止的条件下生长直到杂 生[4,141，因此 SCE可作为致变性分析[201以及有 交克隆出现为止，以后各代杂交细胞都在HAT 关遗传性疾病诊断[s1的一个敏感指标。多年来， 里生长。 人们对诱发SCE形成的多种因素进行了研究， 三（）染色体分析 但SCE形成的机制至今仍不十分清楚[191。这里 让杂交细胞繁殖至一定世代，在细胞的对 值得注意的是Braynt等 （1977)，和Alhadeff等 数生长期，加人秋水酞胺 S（igma)，最终浓度为 (1980)[x1关于细胞存在有控制SCE形成的系 O.ltzg/ml,2-3小时后用0.25 胰酶 (Difco.) 统的报道，他们分别用人的正常细胞和中国仓 使细胞从培养瓶表面脱落。细胞经过0.075 鼠细胞株与 SCE频率非常高的 Bloom细胞融 MKC1低渗处理 在（室温为 10分钟），甲醇一冰 合，使 Bloom细胞的SCE频率恢复到正常值。 醋酸 3（:1)混合液固定3次，用常规的空气干 他们认为自发 SCE频率高应是细胞丧失正常 燥法制片。 功能的结果，用种间体细胞杂交可实现这种缺 由于中国仓鼠传色体数目少，它的C一带图 陷的互补，并且有几个遗传系统共同控制着细 样与小鼠有明显的不同，各号染色体又有自己 胞SCE的产生。本文报道通过小鼠细胞与中国 独特的C一带特征[18［l，因此我们用染色体C一带 仓鼠二倍体细胞杂交降低小鼠癌细胞自发SCE 处理来鉴别两亲本的染色体，并区分杂交细胞 频率的实验结果。 中仓鼠的每条染色体。染色体C一带处理简介如 下：片子经0.2NHCl处理1小时 室（温），水 材 料 与 方 法 洗后在饱和的Ba(OH),溶液 6（00C）培育1分 （一）亲本细胞 钟，然后用无离子水迅速洗涤，并在2XSSC液 选择小鼠高致癌性细胞株PG19(HGPRT-) (NaC18.8g,NaC,H,O·2H,04,4g，加蒸馏水 为一亲本，它的细胞遗传学特征见前文[1,111。另 一亲本是取自于健康成年中国仓鼠骨髓细胞。 YanYongshanelal.!Reduced SCE Frequencyof McuseTumorCellsbyMeansofSomaticCellHybr- 二（）细胞融合 idizationBetweenChineseHamsterCellsandMouse 将两亲本细胞 各（约10)混合，用Hanks Cells 39 至500ml,pH7,2)培育1-2小时。片子经水