蛋白质结晶过程.pdfVIP

解析蛋白结晶的过程 说起蛋白结晶，中国可有着很悠久的历史呢。1965 年中国首次人工合成了结晶牛胰岛素。这 是第一个与天然蛋白有着相同性质并具有生物活性的人工合成蛋白，也是蛋白结晶的首个成功例 子。2004 年，中国科学院生物物理研究所常文瑞研究员发现的菠菜主要捕光复合物(LHC-II)的晶体 结构，以封面形式在《Nature》杂志上发表（图1 ）。 最近，饶子和院士等在《Nature》杂志 上发表文章，展示了禽流感病毒 H5N1 聚合 酶内部的晶体结构。此外，饶教授已经解析出 了50 多个重要蛋白质的晶体结构，包括艾滋 病毒基质蛋白SIV-MA、IgA Fc 受体（CD89， JBC 的封面，图2 ）、第一个SARS 病毒蛋白 图2 IgA Fc -3CL PRO 。看着饶教授的丰硕成果，大家可 受体的结构 能都很感兴趣蛋白结晶是怎么样做的，简单说 吧，就是将表达目的蛋白的 DNA 片段 PCR 1．蛋白表达和纯化 这个大家都比较熟 之后克隆到表达载体上，然后在大肠杆菌中诱 悉了，简单说一说。用PCR 扩增目的蛋白的 导表达，得到大量的蛋白并纯化，摸索结晶条 结构域。PCR 产物纯化后克隆到大肠杆菌表 件，等它结晶（时间长短不定），拿到晶体之 达载体上。饶教授在两篇文章中分别用了 后进行 X 射线衍射，收集衍射图谱，通过计 pGEX 6p-1 （GE Healthcare）1 和pET-28a 算，很快就能得到蛋白质的原子结构。看上去 2 的载体，然后在大肠杆菌BL21 （Novagen） 似乎很简单，其实不然。在1971 年蛋白数据 （DE3）菌株中进行表达，再利用相应的层析 库 PDB （ ）刚刚成立时，只有 柱纯化，如果需要的话，还要用蛋白酶将较大 可怜的 7 个蛋白结构；不过蛋白结晶的方法 的标签切除。这一步的关键是得到大量纯化的 也在不断改进，因此PDB 的结构数也呈指数 蛋白质（10mg ），其浓度通常在 10mg/ml 增长，目前已达到了 52684 个。生物通就结 以上，才能进行结晶条件的筛选。不过蛋白表 合绕教授的文章，给大家解析一下蛋白结晶的 达量高了，经常就会形成包涵体，所以还要优 过程。 化变复性的条件，使蛋白正确折叠。 2 ．蛋白结晶 蛋白质晶体的培养，通常 是利用气相扩散（Vapor Diffusion ）的原理来 完成；也就是将含有高浓度的蛋白质（10～ 50mg/ml ）溶液加入适当