蛋中的β-烃基丁酸、乳酸和琥珀酸.docVIP

AMAMFSAc15014 蛋 β-烃基丁酸 乳酸 琥珀酸 气相色谱法 AM-AM-FS-Ac-15014 蛋中的β-烃基丁酸、乳酸和琥珀酸 1.仪器和试剂 1.1 仪器 (a)气相色谱仪——具有火焰离子检测器。操作条件:用100—120目，载带10%丁二酸二乙二醇醋 (DEGS)GaS-Chrom Z填充3m×4mm内径的玻璃管。温度 (℃):柱温130，注射口200,，检测器200;He 80ml/min;H 37ml/min,空气400ml/min;电流计满标灵敏度9×10-10A;5mV记录仪;记录纸速度50cm/h。 (b)GC柱——在250ml烧杯中，将1.2g稳定的DEGS溶于100ml丙酮，加10.8g100—200目Gas-Chrom Z到DEGS-丙酮溶液中。在蒸气浴上蒸发丙酮，不时用玻璃棒搅动，放入50—60℃真空炉内完全蒸发1h。用丙酮冲洗GC管，并用真空干燥。用5%二甲基二氯硅烷的甲苯溶液装满管，放置5min。用MeOH冲洗管子直到洗液对石蕊显中性(约300ml)，真空干燥。用涂好的载体填充管，规定在200℃通入约30ml/min的N，气流48h。可能会接触快速加热器的柱子的进口部分不要填充。(任何给定丙基酯的等效分离柱均可使用)。 (c)过滤漏斗——约35mm直径的短茎玻璃漏斗。 1.2 试剂 (a)三氟化硼-1-丙醇溶液——10%。制备如下:在通风橱里，按下列顺序或按与此相当的气路顺序安装，一前一后连接到有几节短聚四氟乙烯管的BF3气瓶，把250ml PrOH转入瓶底，称重，并在冰浴中冷却，把冰浴中的瓶连接到气路中，慢慢将BF3气泡鼓入PrOH直到吸收22g为止(在放入管子之前，到从PrO)H中取出，玻璃管必须一直通以BF3，如果加入的BF3超过22g，用PrOH稀释到PrOH的总毫升为11.4×g BF3。试剂贮存在玻璃具塞瓶中，放入冰箱。 市售试剂14%(w/v)，不加稀释即可用，也可用1vol十0.6vol PrOH稀释液，(注:要用有效的排风设备除去BF3蒸气，避免接触到皮肤，眼睛和呼吸系统。 (b)乳酸钙标准溶液——当天新配。把0.856g USP乳酸Ca·5H2O溶于H2O，稀释到100ml(溶液A:5.0mg乳酸当量/ml)，用H2O分别将25，20，15和5ml溶液A稀释到50ml，配制含量为2.5(B)，2.0(C)，2.0(C)，1.5(D)和0.5(E)mg乳酸当量/ml的溶液。 (c)琥珀酸标准溶液——当天新配。将1.000g琥珀酸溶于H2O，并稀释到100ml(溶液F:10.0mg/ml)。分别将25，25和15ml溶液F用H2O稀释到50，100和100ml，配制含5.0(G)，2.5(H)和1.5(I)mg/ml的溶液。 (d)苯乙酮 (AP)溶液—— (1)标准溶液——把0.800g苯乙酮溶于PrOH，并在容量瓶中稀释到100ml，室温下保存。(2)稀释溶液——当天新配。移取20ml PrOH，10mlAP标准溶液I和20ml CHCl3放入125ml分离器 (若GC系统不能使用CHCl3可用醚代替。然而用醚进行色谱分离，必须在酯化作用后24h内进行)。加40ml饱和(NH4)2SO4溶液，塞好，摇动分离器1min，使液层分开，排出底部的水层，弃去，将上层转入玻璃塞细口瓶加5g无水Na2SO4。 (e)醚——无水的，乙醇含量不超过0.05%。 (f)β-烃基丁酸钠标准溶液——把0.121g β-轻基丁酸钠溶于H2O，稀释到100ml(1mgβ-控基丁酸钠当量/ml)。 2.试验过程 2.1. (a)乳酸和琥珀酸——见下表用于校准的标准溶液。对于每一组合按表中列出的体积移取乳酸钙和琥珀酸标准溶液，放入250ml $24/40圆底烧瓶，在蒸汽浴上蒸发至干，或在100℃旋转蒸发器上更快地蒸干。取出仅够1天用的BF3-PrOH，放入25ml带玻璃塞的锥形瓶。移取2ml BF3-PrOH放入250ml圆底瓶，将短茎过滤漏斗(c)插入瓶颈，在蒸气浴上回流10min。 从蒸气浴中取出，冷却到室温，加4ml饱和(NH4)4SO4，移取1ml AP标准溶液和2ml CHCl3入瓶，振荡混合(如果GC系统不能用CHCl3，可用醚代替。然而，必须在酯化后24h内用醚进行色谱分离)。把瓶的内容物倒入30ml分离器，塞好，摇1min，使之分层。放出底层并弃去，把上层转入螺口玻璃瓶，加入约3g无水Na2SO4用Al箔盖住，用帽密封，简短地摇动。如果在制备以后使用，应存放在冰箱中。 调节气相色谱仪的灵敏度和衰减，以便不加稀释即适用于标样范围(对调节好的气相色谱仪，内标(AP)的峰高约为满度的1/3)，对于标样和样品