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试验药剂与器械.doc
.1初筛培养基
矿物质溶液I(2.25%KH2P04)、8%Na2C03和2.5%半胱氨酸盐酸盐(100ml)
挥发性脂肪酸混合液:30mL蒸馏水、丁酸、异戊酸、戊酸和2-甲基丁酸各lmL、
10mol/L的NaOH、
维生素混合液(每升含):硫胺素,20mg:泛酸钙,20mg:烟酸,20mg:核黄素,20mg;
吡哆醇,20mg:对氨基苯甲酸,lmg:生物素,0.5mg:维生素B12,0.2mg:
叶酸,O.125mg:四氢叶酸,O.125mg。.22u m滤膜。
基础培养液(每升含):,Nacl,5.63g、(NH4)2SO4, 5.63g、MgCl2·6H20,0.53g:
CaCl2·2H20,0.41g、MnCl2·4H20,O.172g、FeS04·7H20,0.125g、ZnCl2,0.059g、COCl2·6H20,0.013g。 0.2%刃天青,lmL:蒸馏水,795mL、半胱氨酸盐酸盐,1.5g、羧甲基纤维素钠,10g、琼脂粉,15g。
矿物质溶液I、8%Na2C03、VFA混合液、维生素混合液、无细胞瘤胃液分别为0.4mL、0.4mL、0.3mL、0.1mL、0.1mL。
2富集和传代培养基(培养基B)
(每升含):基础培养基(其中NaHC03,5.0g、蛋白胨,1.0g、酵母粉,1.0g),500mL;
矿物质溶液A(其中每100ml含KH2P04,0.3g:(NH4)2SO4,0.3g、 NaCl,0.6g:
CaCl2·2H20,0.04g:MgS04·7H20,0.058g),165ml:
矿物质溶液B(每100mL含K2HP04·3H20 0.396g),165mL:半胱胺酸盐酸盐,1.5g:O.1%刃天青,1.0mL;纤维二糖,10g 到25mL(或150mL)西林瓶中
3复筛培养基(培养基C)
矿物质溶液I(2.25%KH2P04)、8%Na2C03和2.5%半胱氨酸盐酸盐
挥发性脂肪酸混合液:30mL蒸馏水、丁酸、异戊酸、戊酸和2-甲基丁酸各lmL、
10mol/L的NaOH、100ml蒸馏水
维生素混合液(每升含):硫胺素,20mg:泛酸钙,20mg:烟酸,20mg:核黄素,20mg;
吡哆醇,20mg:对氨基苯甲酸,lmg:生物素,0.5mg:维生素B12,0.2mg:
叶酸,O.125mg:四氢叶酸,O.125mg。.22u m滤膜。
基础培养液(每升含):,Nacl,5.63g、(NH4)2SO4, 5.63、MgCl2·6H20,0.53g:
CaCl2·2H20,0.41g、MnCl2·4H20,O.172g、FeS04·7H20,0.125g、ZnCl2,0.059g、COCl2·6H20,0.013g。 0.2%刃天青,lmL:蒸馏水,795mL、半胱氨酸盐酸盐,1.5g、5片1cm×5cm大小的Whatman No.1滤纸
矿物质溶液I、8%Na2C03、VFA混合液、维生素混合液、无细胞瘤胃液分别为2.4mL、2.4mL、1.8mL、0.6mL、0.6mL。
3菌种初筛
lmL注射器、20mL西林瓶、
革兰染色:
1.结晶紫溶液
A液:结晶紫2g、95%乙醇20 mL
B液:草酸铵o.8g、蒸馏水80 mL。需在用前24H将A液、B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。
2.碘液:碘1g、碘化钾2g、蒸馏水300 mL,即碘与碘化钾混合并研磨,加入几毫升水,使其逐渐溶解,然后研磨,继续加入少量蒸馏水至完全溶解,最后补足水量。也可用少量蒸馏水,先将碘化钾完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300 mL。
3。脱色液:95%乙醇。
4.复染液
A贮存液:沙黄2.5g、95%乙醇loo mL
E.应用液:A液10mL、蒸馏水90 mI
初筛和复筛药品总量:
KH2P04,5.1g、Na2C03,16g、半胱氨酸盐酸盐9.5g、蒸馏水无限量、
丁酸2ml、异戊酸2ml、戊酸2ml、2-甲基丁酸2ml、10mol/L的NaOH、
硫胺素,40mg:泛酸钙,40mg:烟酸,40mg:核黄素,40mg;吡哆醇,40mg:对氨基苯甲酸,2mg:生物素,1mg:维生素B12,0.4mg:叶酸,0.25mg:四氢叶酸,0.25mg。.22u m滤膜。
Nacl,22.46g、(NH4)2SO4,11.86g、MgCl2·6H20,1.06g、CaCl2·2H20,0.9、MnCl2·4H20,0.344g、FeS04·7H20,0.45g、ZnCl2,0.118g、COCl2·6H20,0.026g。 0.2%刃天青,lmL:、羧甲基纤维素钠,10g、琼脂粉,42g。
NaHC03,10.0g蛋白胨,17.0g、酵母粉,
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