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生化分离技术实验报告 指导老师：彭老师 学院：生命科学学院 专业：生物科学类 班级：生科121班 姓名：周蓉存 学号：1207040112 实验一 醌类化合物 实验一 大黄中大黄素的提取、分离和鉴定 目的和要求 熟悉蒽醌类成分的提取分离方法。 掌握pH梯度提取法的原理和操作技术。 学习羟基蒽醌类化合物的鉴定方法。 二、仪器和试剂 仪器：天平，250ml烧杯，500ml烧杯，250ml分液漏斗，回流提取装置（圆底烧瓶24/29，球形冷凝管），布氏漏斗、100ml量筒，，250ml锥形瓶，pH试纸，蒸发皿和药匙。 材料：100-200目、40-80目硅胶（青岛海洋化工） 试剂：乙醚，20%硫酸溶液，盐酸，5%碳酸氢钠溶液，5%碳酸钠溶液，0.25%氢氧化钠溶液，5%氢氧化钠溶液，石油醚（沸程60~90℃）-乙酸乙酯（7：3），石油醚（沸程60~90℃）-乙酸乙酯（15：1）。 三、实验方法 (一 （二）实验流程图 大黄粉 20%硫酸 直火加热，抽滤，干燥 滤饼 乙醚回流提取器回流提取 乙醚层 5%NaHCO3 水层 乙醚层 盐酸 5% Na2CO3 黄色沉淀 水层 乙醚层 HCl 0.25%NaOH 大黄酸结晶 黄色沉淀 水层 乙醚层 HCl 5%NaOH 大黄素结晶 橙色沉淀 水层 乙醚层 芦荟大黄素结晶 HCl （回收） 浅黄色沉淀 （大黄酚+大黄素甲醚） 硅胶住色谱 先洗脱下部分 后洗脱下部分 （大黄酚） （大黄色甲醚） 大黄酚结晶 大黄素甲醚结晶 三、实验结果 按上述操作步骤以得到的产物以及特征如下 大黄酸(Rhein) 大黄素（Emodin） 芦荟大黄素(Aloe-emodin) 大黄酚(Chrysophanol) 实验小结 1.注意事项 1）酸水解过程中加热时间应足够长，以保充分。 2）同一碱液提取可分为几次萃取，以保证提取充分，可以用薄层色谱作监测。 3）乙醚总提取物要用保鲜膜封严实，防止乙醚挥发。 2.结果分析 试验中存在一些小失误（酸水解过程时间充分，pH控制不精准）造成产品的提取率不是很高，总结经验，再次实验时尽量减少误差。 3．通过实验操作，掌握了蒽醌类成分的提取及分离方法，温故了冷凝回流，抽滤等实验操作方法。 实验二 黄酮类化合物 实验二 酸碱法提取芦丁 目的和要求 1.通过芦丁的提取和精制掌握酸碱法提取黄酮类化合物的原理及操作 2.通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 仪器和试剂 1.仪器：2个500ml烧杯，2个250ml烧杯，2个50ml锥形瓶，3个15~25ml锥形瓶，1个中号布氏漏斗，1个小号布氏漏斗，3个10~15ml试管，1个玻璃棒，1个2~3cm的空气冷凝器，1个小号玻璃漏斗，1个枪式干燥器，1个水浴锅，2个滴管，1个250ml分液漏斗，1个冷凝管。 2.试剂：20g槐花米，少许镁粉，1~1.5gCaO， 95%乙醇，浓硫酸，浓盐酸，100ml 1%硫酸。 试验方法 （一）操作步骤 1. 芦丁的提取 称取槐花米20g，置于干燥的研钵中用钵棒挤压成粗粉。称取1~1.5g的石灰粉，置于干净的小研钵中，加入10ml水后研成乳液备用。将粉碎的槐花米置于500ml烧杯中，加水300ml，在搅拌下加入上述制备的石灰乳。调节pH至8~9，加热至微沸，维持pH值30分钟，趁热抽滤。弃去滤渣，冷至60~70℃，用浓盐酸调至pH4~5，静置1h，析出粗制芦丁，抽滤弃去滤液，收集粗制芦丁。将粗制芦丁悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15分钟，然后趁热过滤，弃去不溶物，充分静置，过滤，收集芦丁结晶，在60~70℃干燥，得精品芦丁。 2.芦丁的鉴定 取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使其溶解，分成三份做下述实验： 盐酸镁粉反应：取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，再加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。 （2）Molish反应：取上述溶液1~2ml，然后再加入等体积的10%α-萘酚/乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察界面产生的颜色变化。 （二）实验流程图