11细工第9、10章.ppt

第九章植物体细胞无性系变异与突变体的筛选 本章学习重点 影响体细胞无性系变异的因素； 体细胞无性系突变体的筛选程序。 第一节植物体细胞无性系变异 一、体细胞无性系变异的普遍性 二、体细胞无性系变异的类型 三、体细胞无性系变异的遗传基础 四、体细胞无性系变异的诱导 一、体细胞无性系变异的普遍性 离体培养所产生的再生植株统称为体细胞无性系。 体细胞无性系变异是指在离体培养再生植株上表现出来的变异，有时也指培养物（细胞或愈伤组织等）表现出来的变异。 二、体细胞无性系变异的类型 遗传变异 非遗传变异 三、体细胞无性系变异的遗传基础 1.染色体数目变异 2.染色体结构变异 3.基因突变 4.基因扩增 5.基因丢失 7.DNA碱基修饰 8.转座子的激活 9.基因重排 四、体细胞无性系变异的诱导 自发变异 人工诱发变异 （一）自发变异 在植物组织培养中，经常能发现某些再生植株在形态、性状等方面与原来亲本性状不同的变异。 离体培养再生植株的自发变异远远大于自然变异（10-7-10-6），体细胞无性系变异的变异率可以高达30-40%，有时甚至高达100%，某一具体性状的变异率在0.2-3%之间。 影响体细胞无性系变异的因素 以分化程度较高的组织或细胞为外植体，在较高的激素浓度条件下诱导愈伤组织，并经过较长时间的继代培养，然后再分化形成再生植株，有可能得到较高频率的体细胞无性系变异。　 （二）人工诱发变异 1.物理诱变 以组织器官为诱导材料，可以选择辐射强度较大的γ射线、中子等进行辐射。 以细胞或原生质体，则可选择X射线、紫外线等。特别是以原生质体为诱导材料时，可以使用紫外线照射。 2.化学诱变 常用的化学诱变剂有： 碱基类似物：核酸复制时，可掺入到新合成的DNA分子中引起错配，如8-氨基鸟嘌呤； 烷化剂：如环氧乙烷，可引起DNA的碱基烷化，从而造成碱基错误配对； DNA分子结构插入物：如亚硝酸，可改变遗传密码的阅读顺序而导致突变。 第二节 植物体细胞无性系突变体的筛选 一、突变体的筛选方法 二、突变体筛选的一般程序 三、植物体细胞无性系变异的应用 一、突变体的筛选方法 田间表型选择法 离体筛选 绿岛法 （一）田间表型选择法 即从田间栽培的大量再生植株中筛选出优良变异单株。 工作量虽然大，但较为简单，能直观表现性状变化，利于直接判断改良性状。目前育成的有关品种多是采用这一方法获得的。 （二）离体筛选1.直接筛选法 直接向培养基中加入盐类、除草剂、重金属、抗生素等，或采用干旱或冷、热和冰冻处理，获得抗性愈伤组织或抗性细胞系。 2.间接选择法 是一种借助于与突变表现有关的性状作为选择指标或筛选压的筛选方法。 （三）绿岛法 三、植物体细胞无性系变异的应用 Thank You! 基因突变 DNA碱基序列中单个或多个碱基对发生的变化，包括碱基序列替换、插入、缺失等。 基因突变被认为是体细胞无性系变异的重要来源之一。植物组织和细胞经离体培养后，在愈伤组织的脱分化和再分化过程中常常会引起基因发生突变。 基因扩增 细胞内某些特定基因的拷贝数专一性地大量增加的现象，是细胞在短期内为满足某种需要而产生足够的基因产物的一种调控手段。 转座子 转座子是基因组中一段可移动的DNA序列，可以通过切割、重新整合等一系列过程从基因组的一个位置“跳跃”到另一个位置。 转座子的激活 转座子活化可以引起基因表达的广泛变化，因此无性系变异频率才如此之高。 转座子具有使不活动的结构基因活化的特点，因此会有显性突变。 转座子还可使多拷贝基因中那些不表达的拷贝活化，提高基因表达的强度，即基因放大。 供体植物的遗传背景 基因型：不同物种、不同品种的外植体，其变异频率差异较大。 倍性水平：多倍体和染色体数目较多的植物，其变异频率比二倍体和单倍体高。 外植体的类型 再生植株的变异频率： 原生质体培养的再生植株＞细胞培养＞组织、器官培养 性细胞培养的再生植株＞体细胞培养 外植体的生理状态 ◆同一种植物不同部位的外植体，变异频率不同； ◆分化程度较高的组织产生的再生植株更容易发生变异： ※ 以分生组织为外植体的再生植株变异频率很低； ※ 以分化组织为外植体的再生植株容易发生变异。 植物激素 高浓度的细胞分裂素（6-BA）往往会引起体细胞基因突变、染色体的丢失等现象； 高浓度的GA和IAA往往会造成畸形胚的高频发生； TDZ使再生植株大多是白化苗或玻璃化苗。 培养基物理状态 一般来讲，悬浮培养的细胞较固体培养的细胞易产生变异。 继代次数 由继代次数引