2.第四章 病毒.ppt

微生物学 第一节 病毒 噬菌体侵染宿主细胞 T2噬菌体的一步生长曲线 植物患病毒病后，主要出现三类症状： ①因叶绿体被破坏或不能合成新的叶绿素，而引起花叶、黄化或红化等症状； ②植株发生矮化、丛枝或畸形等； ③形成枯斑或坏死等症状。 ?????????????????????????????????????????????????????? 水稻矮缩病 黄瓜花叶病毒（CMV）在番茄上引起的蕨叶症 植物病毒一般无特殊吸附结构，只能以被动方式侵入，通过因人为地或自然的机械损伤所形成的微伤口进入细胞；或者靠携带有病毒的媒介，主要靠是有刺吸式口器的昆虫（蚜虫、叶蝉和飞虱等半翅目昆虫）取食将病毒带入细胞。 植物病毒一旦进入细胞后，增殖产生的子代病毒或病毒核酸可通过病毒编码的运动蛋白（movement protein）与胞间连丝的相互作用从受染细胞进入邻近细胞而实现病毒粒的扩散和传播。 T4 噬菌体的生命旅程 噢，一只倒霉的大肠杆菌遇了细菌病毒T4噬菌体！ 病毒马上抓住猎物不放，但是大肠杆菌体积是病毒的1000倍。病毒怎么办呢？ 请看： 病毒的蛋白质外壳发挥作用，将病毒的核酸物质注入大肠杆菌体内，请注意病毒的外壳最后会被弃在寄主体外。 最后: 大肠杆菌死亡并破裂，释放出里面的病毒，新一代病毒开始新的生命旅程 随着时间的推移，细菌的数量变得越来越少，这是因为它们被细菌病毒杀死了，这种现象也称为“溶菌”现象。 在涂布有敏感宿主细胞的固体培养基表面，若接种上相应噬菌体的稀释液，则在菌苔上形成一个具有一定形状、大小、边缘和透明度噬菌斑（负菌落）。 2. 噬菌体效价的测定 噬菌体的鉴定指标， 纯种分离和计数。 效价（titre titer）：表示每毫升试样中所含有的具侵染性的噬菌体粒子数，又称噬菌斑形成单位数（plaque-forming unit，pfu）或感染中心数（infective centre）。 较常用且较精确的测定效价的方法称为双层平板法（two layer plating method） 双层平板法 底层平板（2％琼脂培养基10mL） 上层平板 上层培养基（1％琼脂培养基5mL） 宿主菌悬液（对数期菌液0.2mL） 噬菌体试样（合适稀释液0.1mL） 混匀 37℃ 10余h 计数噬菌斑 双层平板法主要有以下几个优点： ①加了底层培养基后，可使原来底面不平的玻璃皿的缺陷得到了弥补； ②所形成全部噬菌体斑都接近处于同一平面上，因此不仅每一噬菌斑的大小接近、边缘清晰，而且不致发生上下噬菌斑的重叠现象； ③因上层培养基中琼脂较稀，故形成的噬菌斑较大，更有利于计数。 3. 一步生长曲线（one step growth curve） 定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线，称作 一步生长曲线或一级生长曲线（one-stepgrowthcurve）。 反映每种噬菌体的三个最重要的特性参数 潜伏期（latentphase） 裂解期（risephase） 裂解量（burstsize） 指噬菌体的核酸侵入宿主细胞后至第一个噬菌体粒子释放前的一段时间。 （1）潜伏期（latentphase） 整段潜伏期中 没有一个成熟的噬菌体粒子 从细胞中释放出来 潜伏期又可分两段： ①隐晦期（eclipsephase） 指在潜伏期前期人为地（用氯仿）裂解细胞，裂解液仍无侵染性的一段时间。 细胞内正处于复制噬菌体核酸和 合成其蛋白质衣壳的阶段 ②胞内累积期（intracellularaccumulationphase） 又称潜伏后期，在隐晦期后，如人为地裂解细胞，其裂解液出现侵染性的一段时间。 噬菌体开始装配的时期， 在电镜下可观察到已初步装配好的噬菌体粒子。 （2）裂解期（risephase） 紧接在潜伏期后的一段宿主细胞迅速裂解、溶液中噬菌体粒子急剧增多的一段时间。 （3）平稳期（plateau） 指感染后的宿主已全部裂解，溶液中噬菌体效价达到最高点后的时期。 1、用噬菌体的稀释液感染高浓度的宿主细胞； 2、数分钟后，加入抗噬菌体的抗血清（中和未吸附的噬菌体）； 3、将上述混合物大量稀释，终止抗血清的作用和防止新释放 的噬菌体感染其它细胞； 4、保温培养并定期检测培养物中的噬菌体效价（对噬菌体含量 进行计数）； 5、以感染时间为横坐标，病毒的感染效价为纵坐标，绘制出 病毒特征性的繁殖曲线； 一步生长曲线的实验步骤 3 温和噬菌体侵入相应宿主细胞后，由于前者的基因组整合到后者的基因组上，并随后者的复制而进行同步复制，因此，这种温和噬菌体的侵入 并不引起