桉树抗枝瘿姬小蜂关联基因的初步筛选研究.pdfVIP

· 生物技术 · 北方 园艺2013(24)：88～91 桉树抗枝瘿姬小蜂关联基因的初步筛选研究 王 伟 ，徐 建 民 ，李 光 友 ，韩 超 ，吴 世 军 ，陆钊 华 (1．广州市园林科学研究所，广东 广州 510405；2．中国林业科学研究院 热带林业研究所 ，广东 广州 510520) 摘 要：以高感品系巨细桉 “DH201—2”(样品A)和高抗品系尾叶桉 “A107”(样品B)进行转录 组测序，测序结果通过Denovo组装、差异表达基因筛选等技术手段筛选出971条差异表达基 因， l224条特异表达基因；对差异基因序列进行BlastP分析和抗性基因功能分析，最终选取 了19个 目的基因进行实时荧光定量检测。结果表明：19个 目的基因中，除了基因Gl6扩增异常外，其余 18个 目的基因都获得 了较好的特异性扩增，其中，目的基因G1、G5、(、G1O、G18和G19在样品B 中的平均表达量显著高于其在样品A中的平均表达量，目的基因G3、G4和G1l在样品A中的平 均表达量显著高于其在样品B中的表达量；其余 目的基因在 2个样品中表达量差异不显著。 目 的基因G1、G3、G4、G5、G9、G10、G11、G18和 G19可能是与桉树抗枝瘿姬小蜂有关联的基因。 关键词：桉树枝瘿姬小蜂；抗虫基因；转录组测序；荧光定量 中图分类号 ：S718 文献标识码 ：A 文章编号：1001--0009(2013)24一O088—04 桉树枝瘿姬 小蜂 (LeptocybeinvasaFisher La 检测筛选出基因在2个样品中的表达水平，进而筛选出 Salle)属膜翅 目(Hymenoptera)姬小蜂科 (Eulophidae)， 可能与桉树抗枝瘿姬小蜂有关的基因，为开展抗桉树枝瘿 Mendel等[于 2000年在 中东和地中海地区发现该虫危 姬小蜂基因定位标记及转基因等分子育种奠定理论基础。 害桉树，其危害方式主要是在桉树 (Eucalytpusspp．)的 1 材料与方法 嫩枝、叶柄和叶片主脉上产卵，形成虫瘿 ，导致植株矮化 1．1 试验材料 并呈丛枝状 ，对桉树的生长产生严重影响。 供试材料分别为高抗品系尾叶桉 “A107”(样 品B) 林木抗虫机制因树种不同、虫的类型不同而有所不 和高感品系巨细桉 D“H201—2”(样品A) 的叶片，2011 同，通常认为林木的抗性机制是受多个基因控制的，在 年5月采集新鲜叶片后液氮速冻，并保存于--80℃冰箱 杨树抗云斑天牛研究中，利用PAPD分子标记技术初步 备用。 筛选出与抗云斑天牛相连锁的分子标记[2]。目前已知 RNA提取选用 Qiagen公司提供的 QiagenDneasy 的抗虫基因根据来源可分为 3类，第 1类是由细菌分离 PlantMiniKit试剂盒，反转录反应试剂盒为 SYI3RPri— 出来的抗虫基因；第 2类是植物组织中分离出来的抗虫 meScriptTM RT-PCRKit(TaKaRa)，荧光定量试剂盒为 基因；第 3类是由动物体内分离出来的毒素基因。从植 SYBRPrimeScriptTM RT—PCR Kit( KaRa)。 物组织中分离出来的抗虫基因主要是外援凝集素基因、 1．2 试验方法 蛋白酶抑制剂基因以及淀粉酶抑制剂基因等[，而根据