定点突变提高细胞色素P450 BM-3吲哚羟基化能力.pdfVIP

第 64卷 第 9期 化 工 学 报 Vol_64 No．9 2013年 9月 CIESC Journa1 September 2013 定点突变提高细胞色素 P450BM一3 吲哚羟基化能力 张彭湃 ，胡 升 ，黄 俊。，梅乐和 ，雷引林 ，金志华 ，姚善泾 (浙江大学化学工程与生物工程学系，浙江 杭州 310027；。浙江大学宁波理工学院生物与化学工程学院， 浙江 宁波 315100；浙江科技学院生物与化学工程学院，浙江 杭州 310023) 摘要：为进一步提高细胞色素P450BM一3 (A74G／F87V／L188Q)对吲哚的羟基化能力，根据酶结构与功能的关 系，以突变酶 E435T为基础 ，在 168位点引入 D168L突变 ，获得 了吲哚羟基化能力得到显著提高的突变酶 D168L／E435T。突变酶对吲哚的K 为 1．72mmol·L (父本 2．09mmol·LI1)，转化数 (k )为 28．15 rain (父本 4．04rain )，表明D168L定点突变可以略微提高酶对底物 的亲和力 ，但主要 的效应是促进 了底物 的转化速率 ，这两个效应 的综合表现是使酶的催化效率 ( K ) 比父本酶提高了8．48倍 。此外，产物 中副 产物靛玉红的比例也降低为 1．2 (父本 7．3 )，这说 明该突变酶催化吲哚的区域选择性上也更有利于靛蓝的 生成 。 关键词 ：细胞色素 P450BM 3；定点突变 ；羟基化 ；明I哚；靛蓝 DOI：10．3969／j．issn．0438—1157．2013．09．035 中图分类号 ：TQ962．2 文献标志码 ：A 文章编号 ：0438—1157(2013)09—3331—07 Improvingindole—hydroxylation abilityofcytochrome P450BM__3by site。_directedmutagenesis ZHANGPengpai，HUSheng。HUANGJun，MEILehe ，LEIYinlin，JINZhihua。YAOShanjing (DepartmentofChemicalandBiologicalEngineering，ZhejiangUniversity，Hangzhou310027，Zhejiang，China； SchoolofBiologicalandChemicalEngineering，NingboInstituteofTechnologyofZhejiangUniversity， Ningbo315100，Zhejiang，China；。SchoolofBiological ChemicalEngineering，ZhejiangUniversity ofScience8LTechnology，Hangzhou310023，Zhejiang，China) Abstract：Accordingtotherelationship between thestructureandfunction ofenzyme，itwasspeculated thatthecombinationofthemutantenzymeD168LandE435T mightimprovethecatalyticabilityofindole togenerateindigo．ThemutantenzymeD168L／E435Twasproducedbysite—directedmutagenesisconducted onthe168thsiteoftheP450BM一3 (A74G／F87V／L188Q／E435T)anditwasidentifiedwithhigher hydroxylationactivitytow