改良组织块结合胶原酶消化法培养食管癌细胞.pdfVIP

第23卷第4期 江 苏 大 学 学 报 (医学 版) Vo1．23 No．4 2013年 7月 JournalofJiangsuUniversity(MedicineEdition) Ju1．2013 改 良组织块结合胶原酶消化法培养食管癌细胞 王晓慧 (苏州大学附属第三医院检验科 ，江苏 常州 213003) [摘要] 目的：探讨食管癌细胞体外分离培养方法，建立合理、高效的食管癌细胞原代培养模式。方法：应用改良的 培养方法，即先将组织用机械法剪碎后再用胶原酶进行消化 ，对 13例新鲜的食管癌组织进行体外培养，观察人食管癌 细胞生长情况。结果：改良方法培养的细胞生长率为61％，污染率为 15％。结论：改良组织块结合胶原酶消化法成 功建立了较为合理、高效的食管癌细胞原代培养模式。 [关键词] 原代培养；食管癌细胞；改良组织块结合胶原酶消化法 [中图分类号] R73—35．1 [文献标志码] B [文章编号] 1671—7783(2013)04—0362—04 食管癌是世界最常见的六大恶性肿瘤之一，而 在超净台内向无菌 PBS加青霉素、链霉素和氟康 我国是高发区之一，其死亡率在癌症总死亡率 中排 唑，配制成 1000U／mL青霉素、链霉素和 150 L 第4位 ¨。了解食管癌的分子机制可以帮助我们改 氟康唑的无菌．PBS溶液。眼科手术的小剪刀、小镊 善对该疾病的治疗，但人们对其分子和遗传机制还 子和玻璃小皿高压灭菌后烤干备用。配制好含 3％ 未完全了解 。目前，国内建立的食管癌细胞系报 和 15％FBS的DMEM。配制 0．1％ IV型胶原酶和 道较少 。国外研究报道，食管癌原代培养肿瘤 0．25％胰蛋白酶。 细胞成功率为12．5％l8J，这表明成功建立能长期维 1．3．2 标本清洗 超净工作台中取出食管癌组织， 持的食管癌细胞系有相当难度。本研究采用的改 良 放入无菌玻璃平皿中，加6～8mL含1000U／mL青 组织块结合胶原酶消化法可有效地降低污染率，提 霉素、链霉素及 150g／L氟康唑的无菌PBS溶液，浸 高细胞的生成率，现报告如下。 泡 15rain，然后用无菌眼科小剪刀剪去组织中坏死 1 材料与方法 部分。更换加有抗生素及氟康唑的无菌PBS溶液， 用滴管吹打洗涤，反复3～5次，直至组织块发 白、无 1．1 标本来源 血渍，将其剪碎至 1～2mm 并移至 10mL离心管 l3例新鲜食管癌标本取 自2011年3月至 2011 中，800r／min离心5min，弃上清。 年6月于江苏大学附属医院胸外科行食管癌手术切 1．3．3 消化 向上述清洗好的标本 内加入 1～2mL 除的患者。其中，男9例，女4例，年龄 54～71岁，平 0．1％1V型胶原酶，混匀，37℃消化 30rain，然后加 3 均61岁。病理分级：高分化4例，中分化 5例，低分 mL的无血清培养液，重悬后静置5min，弃去上清(因 化4例。将 13例患者按年龄分为2组：≤60岁组，7 为成纤维细胞对胶原酶比较敏感，而上皮细胞相对不 例 ；60岁组，6例。病理诊断全部为食管鳞状上皮 敏感，重悬