牛粪中纤维素分解性细菌的分离筛选试验.pdfVIP

维普资讯 山东畜牧兽医 2O惦年第29卷 牛粪中纤维素分解性细菌的分离筛选试验 孙 雨① 王美君② 卜仕金① (①江苏省扬州大学兽医学院药理与毒理实验室 225009 ②山东农业大学动物科技学院) 摘要 本文主要介绍了牛粪中纤维素分解性细菌的分离筛选、鉴定与临床意义。实验内容包括：到 奶牛场随机采取 1O份粪便作为样品，然后对其进行细菌学检验以鉴定该细菌、分析该细菌与反刍动物 营养的关系，并进一步对其做了药敏试验鉴定。经鉴定该茵对头孢呱啊、头孢唑啉、氟哌酸、丁胺卡那 等药物比较敏感，长期使用这些药物可能大量杀死该类细菌，从而引起反刍动物的消化系统疾病。同时 本实验还使用无机盐纤维素培养基从牛粪中分离出了此类细菌。该实验的细菌分离方法以及药敏实验的 结果在反刍动物的生产实践中具有很好的临床应用前景。 关键词 纤维素分解性细菌 分离筛选 药敏实验 临床意义 中图分类号：$852．6 文献标识码：A 文章编号：1007．1733(2008)05．0008．03 纤维素分解性细菌 (cellulosedecomposingbacteria) 1．2 方法 就是能分解纤维素的细菌I2】，它一般寄宿于反刍动 1．2．1 无机盐纤维素琼脂平板培养基的制备 取 物的瘤胃中。纤维素分解性细菌主要包括好氧性细 纤维素粉2Og、硫酸镁0．3g、氯化钙0．3g、硫酸 菌如纤维单胞菌属 (Cellulomonas)、纤维弧菌属 亚铁 0．005g、硫酸锰 0．004g、氯化锌0．007g、氯 (Cellvibrio)，而在厌氧条件下纤维素的分解，一 化钴0．002g、硫酸氨 1．4g、磷酸二氢钾2．0g、琼 些厌氧性的芽孢梭菌属 (Clostridium)的细菌具有 脂粉 2Og、蒸馏水 1000ml混合后用氢氧化钠溶液 重要作用 J。由于该菌能使纤维素分解成为葡萄糖 调pH值 8．0，灭菌后制成平板培养基备用 。 以供给动物蓄体能量，所以该菌对反刍动物的健康 1．2．2 纤维素分解性细菌的分离培养 以无菌操 起着非常重要的作用 】。此类细菌在反刍动物体 内 作的方法，采取少许生理盐水稀释好的牛粪，划线 过少或是菌群失调那将引起严重的消化系统疾病， 于无机盐纤维素琼脂平板培养基上，37~C培养 例如，反刍动物瘤胃的消化不 良以及各种肠道疾病 37d，并随时观察记录培养基 内的细菌的生长情 等。而在人工条件下，如果提高纤维分解菌的生活 况，然后进行可疑细菌的分离，最后挑取单个菌落 条件可大大提高该细菌群体对该秸杆类饲草的转 到普通琼脂斜面进行纯培养。与此同时对 1O份样 化率。所以加强这方面开发，在提高反刍动物的生 品进行准确的细菌计数。 产性能研究中将是一个突破点，具有很好的临床应 1．2．3 形态学观察 取无机盐纤维素琼脂平板培 用前景。 养基的单个菌落涂片，革兰 氏染色镜检，观察记录 1 材料与方法 菌体形态和染色特征。 1．1材料 1．2．4 生化鉴定 取微量生化管及各种生化培养 1．1．1 牛粪来源 本实验 1O份新鲜的牛粪样品是 基，将分离菌纯培养物的菌种接入后封 口，置于 从山东农业大学南校区的奶牛场中的 1O头奶牛中 37℃培养箱中培养 18—24h，观察结果。 采取的，每份样 品大约 1g左右。采取时准确记录 1．2．5 药敏试验 将获得的菌株的菌液，均匀涂抹 了相应奶牛的膘情、毛色与体重。 于营养琼脂平板，每菌株两板，然后将药敏纸片平 1．1．2 培养基与试剂 纤维素粉、硫酸镁、氯化钙、 均分布，37℃培养24h。按抑菌圈直径大小作为敏 硫酸亚铁、硫酸锰、氯化锌、氯化钴、硫酸氨、磷 感性高低的标准，抑菌圈直径越大表明细菌对该药 酸二氢钾、琼脂粉、蒸馏水、普通肉汤、营养琼… 的敏感性越高。抑菌圈直径 15．1—20real者为高敏 (NA)(均购 自上海伯奥生物科技有限公司)；蛋 度敏感；直径 10．1—15real者为中度敏感；直径在