间接ELISA检测猪链球菌病二联灭活疫苗抗体动态变化.pdfVIP

· 16· 《上海畜牧兽医通讯》2005年第4期 间接ELISA检测猪链球菌病=联灭活疫苗抗体动态变化 沈莉萍1陈 刚2王 建1，3徐锋1陆承平3。 (1上海市畜牧兽医站2011032上海市金山区畜牧兽医站201500) (3南京农业大学农业部畜禽疫病诊断与免疫重点实验室江苏南京210095) 【摘要】为了评价猪链球菌病二联灭活苗的免疫效果，建立了检测该疫苗抗体的间接ELISA方法。以Ⅻ心一 sPA(酶标葡萄球菌蛋白A)作为第二抗体，疫苗菌株超声波破碎抗原为包被抗原。试验证明所建立的间接ELISA特异 性好，比琼扩试验敏感200倍。用此方法检测了氢氧化铝胶、蜂胶、矿物油三种佐剂疫苗的抗体消长情况，铝胶苗抗体 d时仍保持较高 产生的时间比较早，抗体水平比较高，4～5周达到高峰，随后开始下降，二免后抗体水平迅速回升，120 的效价(1：1ooo)；蜂胶苗和油佐剂苗抗体上升比较舒缓，持续时间长，7周后还能维持一定的抗体水平(1：400)。 关键词：ELISA；猪；链球菌病；疫苗；抗体 20世纪90年代以来，猪链球菌病在江苏、上海地区的流弃上清，重悬，再离心，重复数次，直至上清液完全透明，悬浮 行情况出现新特征，C群链球菌感染依然存在，而R群的猪 于适量的pH9．6的碳酸盐缓冲液(C．B)中，调氏。o大约1．0 链球菌2型(Strep．suistype2)的感染有后来居上的趋 左右。超声波间断处理30min(20千赫、130瓦)，离心(2000 势[卜3l。为此，研制二联灭活疫苗，以便能控制疾病。本试 r／min，30min)除去大的细菌碎片。用紫外分光光度计检测， 验旨在建立一种检测疫苗抗体的ELISA方法，检测疫苗抗 体在动物体内的消长情况，以评价疫苗的免疫效果。 白含量分别为1．09mg／ml和0．942mg／ml，将制备好的抗原 1材料与方法 分装，一20℃保存备用。 1．4．2操作过程：将上述抗原用0．05 1．1菌株 M的碳酸缓冲液(pH 制疫苗菌株马链球菌兽疫亚种(Streptococcusequisubsp． (0．OlM，pH7．4的磷酸盐缓冲液含0．05％Tween一20，简 zooepidemicus)ATCL35246来自美国菌种保藏中心，猪链球 称PB盯)洗涤3次，封闭液(2％明胶PI垮I)封闭后同前洗 菌2型(S．suistype2)HA9801由南京农业大学动物医学院 涤，置4E备用。用稀释液(含4％PEG(聚已二醇6000)的 提供。菌种经鉴定后甘油肉汤一70℃和冻干保存。 1．2二联灭活疫苗的制备 PBsr)将血清适当稀释，每孔100止，37℃湿盒作用一定时 间，同上洗涤。加HRP—SPA(辣根过氧化物酶标葡萄球菌 将疫苗株ATCL-35246和A9801培养液等比混合，甲 蛋白A)(购自上海生物制品研究所)，用PBS作1：40稀释， 醛灭活，制备铝胶(由南京药械厂提供)二联灭活疫苗，细菌 每孔100“l，37℃湿盒作用一定时间，同上洗涤。每孑L加新配 含量不低于8×108CFU。另按规范【4]配制蜂胶和油佐N-- 置的底物溶液(OPD—H202一柠檬酸一磷酸盐缓冲液，pH 联灭活疫苗。油佐剂苗：向灭活过的上述菌液中加入4％ 5，4)