STAT3和相关生长调控基因在胃癌组织中的表达和意义.docVIP

STAT3及相关生长调控基因在胃癌组织中的表达及意义 　　作者：李静 朴云峰 安鼎伟 金丽君 陈丽 作者单位：吉林大学第一医院消化科，吉林 长春 130021 　　【摘要】 目的 探讨转录信号传导子与激活子3(STAT3)及相关生长调控基因在胃癌发生发展中的作用及意义。方法 应用RT-PCR检测STAT3基因及相关基因c-myc，p53，生存素(survivin)，血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达水平，应用Western印迹法及免疫组化法检测STAT3基因的蛋白水平及定位表达。结果 胃癌组织及癌旁组织中STAT3 mRNA的表达均明显高于正常胃组织(P0.01)，胃癌及癌旁组织中c-myc，survivin，VEGF mRNA的表达上调(P0.01)，p53 mRNA的表达下调(P0.01)，胃癌组织及癌旁组织中STAT3蛋白水平的表达均高于正常胃组织(P0.01)。结论 STAT3基因的持续激活在胃癌的发生发展中起重要作用，可作为早期诊断的指标及治疗的靶点。 　　【关键词】 STAT3;胃癌;基因 　　转录信号传导子与激活子3(STAT3)是STAT家族的重要成员，其所参与的信号传导通路与细胞的增殖、分化及凋亡密切相关，该通路持续激活可导致细胞异常增殖和恶性转化〔1〕。已有研究证实STAT3的酪氨酸磷酸化，即信号依赖的活化形式，在多种肿瘤中普遍存在，并在某些肿瘤中发挥重要作用〔2〕。目前有关STAT3的研究主要集中于白血病、多发骨髓瘤、乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤、肺癌等，国内外关于STAT3在消化系统疾病中的研究尚不多见，国内的研究〔3，4〕多侧重STAT3在胃癌组织中和胃癌细胞中的阳性表达及临床意义等，国外的研究〔5，6〕多侧重于各种细胞因子包括白细胞介素-6(IL-6)、DIF、VEGF等对JAK/STAT信号通路中STAT3活性的影响。本研究拟通过检测STAT3基因在人胃癌组织中基因及蛋白水平的表达，同时检测相关生长调控基因c-myc，p53，生存素(survivin)，血管内皮生长因子(VEGF) mRNA水平的表达，探讨STAT3基因异常在胃癌发生发展中的作用及可能的机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 病例资料 15例均为住院病人(吉林大学第一医院2005年9月～2006年12月)，经胃镜及黏膜活检病理定诊，均行胃癌切除术，术后病理证实为胃癌。男10例，女5例，年龄60～74(平均65)岁。 　　1.2 标本来源 新鲜胃癌术后组织包括正常胃组织、癌旁组织、胃癌组织，部分液氮保存，待提取RNA及蛋白，部分福尔马林固定，石蜡包埋，待免疫组化染色。 　　1.3 主要试剂及仪器 Anti-P-STAT3兔抗人多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗购自Santa Cruz公司，Anti-STAT3及SABC组化试剂盒购自武汉博士德公司。Trizol购于北京鼎国公司，RT-ACE购于Invitrogen公司，Taq DNA聚合酶购于Genomy公司，常规试剂由吉林大学前列腺疾病防治研究中心提供。PCR仪(SONY,Japan),电泳仪(Bio-Rad,USA)，蛋白质电泳转膜仪(Bio-Rad,USA)。 　　1.4 实验方法 　　1.4.1 免疫组化法 按说明书操作。阳性结果为细胞浆或胞核棕黄着色，随机选取5个高倍镜视野，计数阳性细胞占所研究细胞的15%以上即为阳性。 　　1.4.2 RT-PCR法 液氮保存组织常规提取RNA，紫外分光光度计法定量后取10 Μg总RNA逆转录为cDNA，PCR条件：94℃ 5 min;94℃ 30 s，56℃ 30 s，72℃ 45 s，30个循环;72℃ 7 min,同时检测c-myc、p53、survivin、VEGF，以Β-肌动蛋白(Β-actin)为内参。PCR产物以2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，应用天能Gis凝胶成像系统分析，PCR产物量以光密度/面积表示，以STAT3产物量/Β-actin产物量的比值为最终结果，实验重复三次。引物序列：STAT3：正义引物5′TTGCCAGTTGTGGTGATC 3′，反义引物5′AGACCCAGAAGGAGCCGC 3′;Β-actin：正义引物5′AAGTACTCCGTGTGGATCGG 3′ ,反义引物5′ATGCTATCACCTCCCCTGTG 3′;c-myc：正义引物5′CTGCTGCCAAGAGGGTCA 3′，反义引物5′CGTTTCCGCAACAAGTCC 3′;VEGF：正义引物5′ AAAGGAGCCTACAAGA 3′，反义引物5′ TTCACAAGCAGCCAAT 3′;p53：正义引物5′CCTCCTCAGCATCTTA