真菌分类鉴定的研究进展.pdfVIP

第33卷第4期 Vol.33No.4 2010年4月 Apr. 2010 真菌分类鉴定研究进展 朱研研，王耀耀，付美红，刘云清，郝惠云，王亚莉 （华北制药集团新药研究开发有限责任公司，河北 石家庄 050015） [ 摘 要] 阐述了真菌分类的传统分类方法和几种分子生物学方法，传统分类学主要以形态学为主；分子生物学方法主要有 DNA中G+C含量测定、核酸杂交技术、限制性酶切片段长度多态性分析、随机扩增多态性DNA（RAPD）、rDNA序列同源性分析。 [ 关键词] 真菌；传统分类学；分子生物学 [ 中图分类号] Q949.32 [ 文献标识码] A [ 文章编号] 1003-5095 201 [3] 真菌分布广泛、种类繁多。真菌分类系统有De 了前景 。 Bary（1884）系统、Gaumann（1962）系统、Martin2. 1 DNA 中G+C mol % 含量测定 （1950）系统、Whitake（1969）系统和Ainsworth这是最早用于真菌分类学研究的分子生物学技 [1] （1973）系统等。传统的分类鉴定方法主要是表型分 术。特别是在酵母菌中，GC值已成为分类学上的常规 [4] 类法，是以形态和生理化特征为依据，时间较长（一般 工具 。因为每种真菌都有固定的G+C mol% 范围且 2～3个月）。近年来分子生物学技术的发展，PCR技术 较为稳定，不同生物种的G+C含量是不同的，生物种 的应用，开辟了真菌分类鉴定的新途径。 目前分子生 之间的亲缘关系越远，其G+C含量差别就越大，一般 物学鉴定技术具有快速、简便、分辨率高的特点，并可 G+C mol% 相差2%以内被认为同一种内的相 进行多相分类鉴定，能按照种系进化的关系确定精确 两个菌株G+C mol% 差别为4%～5%,可以认为是同一 的位置和定种，使分类鉴定方法更客观合理。主要的 种内的不同菌株，差别为10%～15%，可以认为是同属 分子生物学技术有DNA中G+C mol% 含量测定内不同种，若差别为20%；核酸 ～30%，则认为是不同属或不 [3] 杂交技术；限制性酶切片段长度多态性分析；电泳核 同科内的真菌 。但是两个菌株的DNA碱基组成相同， 型（EK）分析；随机扩增多态性DNA（RAPD）分析；rDNA而DNA序列的同源性很差，两者之间的亲缘关系不一 序列分析；多位点酶切电泳（MEE）。 定很近。 1 真菌的传统分类方法 mol% 之不同，可以认为是不同的菌 各种生物的分类系统都是以形态特征为分类基 值相同的却不一定是相同菌，还要借助于其他鉴定手 础而发展起来的，表型研究对于分类学来说尤为重 段加以定论。 要。以形态学特征为主，生理生化、细胞化学和生态等 2. 2 核酸杂交技术 特征为辅是真菌的重要分类途径。但是真菌种类繁 核酸杂交技术是认知真菌系统发育和进化的有 [5] 多、形态特征复杂，又缺乏标准统一的描述，具有非常 力工具和较有说服力的手段之一 。一般在相同的菌 大的主观性，而且有的菌种形态特征和生理生化指标 种中，DNA/DNA杂交的成功率高达80%以上，若低于 受多种因素的影响而不稳定。真菌形态学研究最大的 20%基本可考虑为无关菌系，65%～80%之间的菌有较 [2] 缺点是不能应用于暂时还不能人工培养的真菌中 。 多的同源性，提示为同一属的不同种。但若结果在 2 真菌的分子生物学分类方法 20%～25%范围时则难以做出判断，应用其他方法分析 随着分子生物学的迅速发展和真菌分类学自身 确定。对属或属以上水平的分类则采用DNA/rRNA杂 发展的客观需求，在真菌现代分类中引入了操作简 交，因为rRNA在进化过程中保守性更强。不同真菌的 便、特异性好且准确可靠的分子生物学技术鉴定方 DNA序列是不同的，杂交时互补的程度越高，则其亲 法。弥补了传统分类的不足，为真菌分类学研究开辟 缘关系越近。同种异株的真菌基因组DNA序列差异较 [6] 。Kurtzman等首先开展对 [ 收稿日期] 2010-01-27 小，一般认定在35%以内 [ 作者简介] 朱研研（1974-），女，工程师，从事微生物菌种选黄曲霉群中各菌种的DNA关系研究，黄曲霉和寄生曲 育、保藏、分类鉴定研究工作。 ·38· 河北化工 第4期 霉显示79%的DNA杂交率，而集峰曲霉和黄曲霉的之间的序列称为核糖体内转录间隔区（internal DNA杂交率只有39%。Kurtzman根据这些研究结果建transcribedspacer 议把黄曲霉和寄生曲霉划为黄曲霉的两个变种，而集 端与18SrDNA的3＇端之间的序列称为核糖体基 峰曲霉则划分为一个新种。核酸杂交技术准确性高于 因内间隔