猪胚胎干细胞培养与建系的影响因素及对策.pdfVIP

维普资讯 76 ChineseJournalofVeterinaryScienceandTechnology Vo1．34 No．10 2004 猪胚胎干细胞培养和建系的影响因素及对策 况 玲 ，冯书堂 ，余 四九 ，牟玉莲 (1．甘肃农业大学 ，甘肃 兰州 730070；2．中国农业科学院 畜牧研究所 ，北京 100094；3．新疆农业大学 ，新疆 乌鲁木齐 830052) 摘要 ：为解决胚胎干细胞 的培养和建系受血清、饲养层、细胞 因子 、传代 时机以及其他一些不 明因素影响而很不稳定的问题 ，在总结猪胚胎干细胞 (EG)培养和建 系的经验教训 的基础上，对一 些常规 的实验方法进行 了改进 ，提 出了消除上述影响因素的对策。 关键词 ：胚胎干细胞 ；饲养层 ；传代 ；血清 ；培养基 中图分类号 ：S814．6 文献标识码 ：B 文章编号 ： 胚胎干细胞是从植入前胚胎 的内细胞 团(ICM) 细胞被公认是研究哺乳动物发育较理想的实验材料 或原始生殖细胞 (PGCs)分离 的、能在体外长期培养 模型 。 并具有多方 向分化潜能和种系嵌合能力的全能性或 目前 ，关于干细胞的研究 已经进入到干细胞 的 多能性细胞 ]。干细胞 的用途非常广泛 ，用干细 生物规律和调控基因的研究阶段 【，但干细胞的培 胞进行器官移植 ，不需免疫抑制 ，使之成为普遍适应 养和建系是调控研究的基础 ，另外干细胞 的建系仍 然存在许多问题有待解决 。国内的干细胞建系仅见 的供体 ]。在组织再生和修复中，骨髓和外周血液 于小鼠，其他动物并不多见。笔者对在猪胚胎干细 中的多能干细胞到达心脏 ，可 以治疗化疗药物造成 胞建系过程中积累的经验加 以总结 ，并提 出了消除 的心肌病 。干细胞还可 以修复高血压 、动脉粥样硬 诸多影 响因素的方法 。 化引起 的血管损伤 。另外 ，干细胞还可 以分化为肝 细胞代替有病 的肝组织；干细胞在治疗神经系统的 l PGC的收集时机 疾病中独具优势…。 胚胎 中生殖细胞 的前体称 为原始生殖 细胞 在基 因治疗领域 ，转导基 因往往是补偿缺 陷基 (PGC)，它最早出现在胚胎原肠胚位于原条后端 的 因的表达或抑制基因的过剩表达 的，但导入基 因的 胚外组织 中，原肠胚形成结束时位于尿囊基部 ，并进 整合表达难以精确控制 ，特别是外源基 因插入对其 入后肠 内胚层 中，然后沿着背部肠 系膜 向生殖嵴迁 他细胞基因产物的效应 尚无法预知 ，更大 的问题是 移 。PGC进入生殖嵴后继续分裂 【，一般收集 25 许多被用作基 因操作 的细胞体外不易被转染和增殖 ～ 29d的猪胚胎 ，这时生殖嵴的PGC含量最高且 尚 传代。胚胎干细胞 (ES)是能产生各种类型分化细 未分化。笔者经试验发现 ，从怀孕 26～27d的猪胚 胞 的干细胞 ，导入外源基因后能稳定地增殖传代并 胎分离的生殖嵴 EG细胞培养效果最好l8-!。分离 可获得长效的表达 。因此，应用遗传学技术对 ES 生殖嵴时应尽量将生殖嵴取完整。不要丢失 I(Cs。 细胞在体外进行改造 ，可使基因治疗更具靶 向性 。从 但也不能带多余的组织，否则培养时杂细胞太多将 而克服 目前基因治疗 中可能遇到的困难 ]。 影响EG细胞 的生长。在研磨生殖嵴时应尽量研 在发育生物学 的研究领