水稻线粒体atpA基因的克隆及其和细胞质雄性不育的关系.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Being)12(4) 1- 4 1990 水稻线粒体atpA基因的克隆及其与细胞质 雄性不育的关系 李大东 王 斌 （中国科学院遗传研究所，北京） 本研究以水稻 BT型细胞质雄性不育系秋光A和相应的保持系秋光B为材料，提取线粒体 DNA, 用限制性内切酶完全酶解，以玉米线粒体 。tpA基因和菠菜叶绿体 。tpA基因做为探针，进行分子杂 交，将保持系线粒体 。tpA基因定位在 3.5kb的 BamHI酶切片段上，并且以pER322为载体，克隆了 这一片段．另外，在BamHI完全酶解谱带的杂交结果中，不育系线粒体基因组中有两条阳性杂交带，分 别是3.5kb和2.9kb，而保持系线粒体基因组中只有3.5kb一条阳性杂交带，因而认为水稻不育系线 粒体基因组中可能有两个 。tpA基因拷贝，而相应的保持系线粒体基因组中只有一个 。tpA基因拷 贝。 关键词：水稻，细胞质雄性不育，atpA基因 植物线粒体内膜上的ATP合成酶在能量 育系秋光A及其相应的保持系秋光B。此材料 产物的形成过程中起重要作用。合成酶由F, 由北京市农科院作物所洪立芳先生提供。 和 F。两部分构成，F：是酶蛋白的膜外区域， 二（）atpA墓因探针 具有催化 ATP合成的功能，由5个亚基组成 实验中使用了玉米线粒体 。ipA基因探针 (aq,8q丫，“，。），，〔】巧‘，，，］；F。是酶蛋白的膜内区 和菠菜叶绿体 atpA基因探针，用两种探针分 域，具有质子跨膜传输功能，至少由4个亚基组 别进行杂交实验，得到的结果是一致的，玉米线 成 6（,7,8,9)[161。在酵母和动物细胞中，F，部 粒体 。tpA基因探针为爱丁堡大学 Leaver教 分的所有亚基均由核基因编码阴，在高等植物 授提供，4.8kb的HindIII酶切片段中含有完 中则不同，ATP酶 。一亚基是由线粒体基因编 整的玉米线粒体 atpA基因Is]。菠菜叶绿体 码的C1,4,7I，其它几个亚基由核基因编码。 atpA基因探针为我所 105组提供，2.45kb的 水稻是重要的粮食作物，研究其线粒体 SalI酶切片段中含有完整的叶绿体 。apA基 atpA基因的结构、表达及其在不育系和可育系 因。克隆所用载体为 pBR322质粒，受体菌为 中的差异，对全面了解核质间基因的协调表达 大肠杆菌15920 和水稻细胞质雄性不育分子机制，都是非常有 三（）材料处理和培养 意义的。本研究首先克隆了水稻线粒体 。tpA 取水稻种子 100克，用3多安替福民表面 基因，初步探讨了它在水稻细胞质雄性不育系 消毒 10分钟，自来水冲洗 10分钟，再用无菌水 和可育系线粒体基因组中的差异。 洗涤3-，次。种于铺于无菌水打湿的纱布上， 30℃黑暗培养，每天换水 2-3次，7-8天剪 材料和方法 （一）实验材料 LiDadongetal.:RiceatpA GeneCloning and RelationshipwithCutoplasimicMaleSterility 实验所用材料为水稻BT型细胞质雄性不 本文于 198，年3月9日收到。 取黄化苗，一20℃冷冻保存备用。 缓冲液洗一次，回收的效果可通过紫外光下检 （四）水稻线粒体 DNA 的提取及纯化 查负极端胶条中有无 DNA来确定。将上面提 参照Kemble[8，和 Chase[21方法，经修改 到的250川 含有回收DNA的溶液，用等体积 用于水稻线粒体 DNA的提取纯化，详细步骤 酚和酚一氯仿混合液各抽提一次，乙醇沉淀， 可参照我们实验室以前的