耐碱性木聚糖酶产酶菌株的选育.pdfVIP

34 生 物 技 术 2010年20(1) 关键词：碱性；木聚糖酶；芽孢杆菌；筛选 中图分类号：Q935 文献标识码：A 文章编号：1004—311X(2010)01—0033一o4 ScreeningoftheAlkaliResistanceXylanaseProducingStrains WENQing—jiang，wUXiao—jie，LIYe—xin，MuJuan ，DANGYong (ShanxiInstituteofMicrobiology，Xi’all710043，China) Abstract：Objective：Screeningproducesalkalinexylanaseenzymeactivityofhighstrain．Method：18xylanaseproducingstrainswereob． tainedfrom alkalineconditionbyassayingcongo—redhydrolyzedcircleontheselectivemedium．andxylanaseactivityundershake—flask fermentation，inwhichxylanwereusedastheonlycarbonsource，andthemaximum enzymeactivityachieved335．14IU／nf1．Itwas ten tativelyidentifiedasBaciHusbasedonitsmorphologicalcharacterization．Result：Thestudyoncharacteristicsofxylanasewas carriedout． Theresultsshow thattheoptimalreactionconditionofxylanasewere60oCandpH8．0．anditsactivityremained8O％ofmaximum activity atpH 9．0．Conclusion：Itexhibitfavorablepotential forapp~cationintheprocessingindustries Keywords：alkaline：xylanase；Bacillus；screening 木聚糖酶是指可以将木聚糖催化水解成低聚木糖或木糖 深棕色固体即为麸皮木聚糖粗提物。 的酶系总称，包括多种内切酶和外切酶。内切 B一1，4一D一 1．2．2 DNS(3，5一二硝基水杨酸)试剂配制 木聚糖酶(endo—B一1，4一D—xylanase)[Ec3．2．1．8]，简称 将 14gNaOH和216g酒石酸钾钠充分溶解于600mL水 木聚糖酶，是木聚糖降解酶系中最关键的酶，它在食品、饲料、 中，水浴至45℃，加入 7．5gDNS充分溶解，再加入 5．6mL预先 造纸等行业具有J阔的应用前景。自然界中能够产生木聚糖 于5O℃水浴中溶化的苯酚和6．Og偏重亚硫酸钠，充分溶解后 酶的微生物包括各种细菌、放线菌、真菌和酵母菌，目前对木 定容1000mL，置于包有报纸的棕色瓶中，放置5d后使用。 聚糖产生菌研究较多的是丝状真菌，如曲霉属和木霉属，其次 1．2．3 菌种初筛 是细菌中的芽孢杆菌属。其 中霉菌来源的木聚糖酶多为酸 称取采集到的样品5g加人 100mL蒸馏水中，煮沸 10min， 性，而芽孢杆菌来源的木聚糖酶多为中性或碱性。 然后将菌液将进行 lO～一l0 梯度稀释，涂布于选择培养基 近年来，随着酶法造纸技术的发展，碱性木聚糖酶的研究 平板上，37℃下培养24h，用 0．1％刚果红溶液处理 1h(覆盖整 与开发已引起了人们高度关注。在造纸工业中利用术聚糖酶 个平板)，再用 1mol／LNaC1溶液脱色 1h，挑取透明圈较大的 进行生物漂 白，可以大量减少漂 白过程中氯用量，降低对环境