干细胞基础知识.ppt

多能干细胞（ pluripotent stem cell ），具有分化出多种组织细胞的潜能，但却失去了发育成完整个体的能力，发育 潜能受到一定的限制。 在blastocyst时期，细胞已可被区分成外层之滋养层细胞（trophoblast cells）和内层之内细胞团（innercell mass），中间具有一个囊腔。滋养层细胞将来和子宫壁结合发育成为胎盘，供应胚胎发育所需之营养。内细胞团则发育成为真正人体的所有组织和器官，包括三个胚层。 专能干细胞（ multipotent stem cell ），这类干细胞只能向 一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化，如上皮组织、基底层干细胞、肌肉中的成肌细胞等。 (4) ES细胞在体外分化抑制培养中，呈克隆状生长，细胞紧密地聚集在一起，形似鸟巢，细胞界限不清，克隆周围有时可见单个ES细胞和分化的扁平状上皮细胞。 (5) ES细胞增殖迅速，每18—24 h分裂增殖 1次。 (6) 此外，其还可以在体外进行选择、操作、冻存。冻存的细胞可在需要时随时解冻，继续培养不失其原有特性，并且来自一个克隆的细胞具有同样的特征。 (3) ES细胞可进行诱导分化 *用RA（维甲酸）作诱导90％以上的ES细胞分化为神经胶质细胞， *聚集培养的ES细胞诱导分化则可分化为有节律性收缩的心肌细胞。 *将ES细胞注射到同源动物皮下，可形成组织瘤，其细胞组成可代表3个胚层细胞。 *用ES细胞作核供体进行细胞核移植，可以得到可发育重构胚和动物个体。 Pluripotent murine embryonic germ cells identified by red staining A culture dish containing hundreds of colonies of murine embryonic germ cells. Each red-stained spot represents an individual colony comprised of hundreds or thousands of stem cells. 1. ES细胞的全能性主要体现在以下几方面： ①形成畸胎瘤。将ES细胞注入同源动物皮下可形成畸胎瘤，包括三个胚层细胞； ②形成类胚体。培养ES细胞在非粘附底物中悬浮生长，或控制增殖细胞数目。能够使之生成类胚体，它是一个与畸胎瘤相似的多种系混杂的集合体、具有三个胚层组织； ③直系分化。通过控制ES细胞生长环境，或遗传操纵特定基因表达，ES细胞可直接分化成某特定种系细胞，例如将神经决定基因NeuroD2和NeuroD3转人ES细胞，可使之分化为神经细胞； ④形成嵌合体。将ES细胞注射到同种动物囊胚腔中后，可以形成嵌合体（chimera），ES细胞可以参与嵌合体各个器官包括生殖腺的发育。这是检验一个细胞系是否为ES细胞的标准。 2. ES细胞生物学特性 细胞形态结构及核型 细胞的高度分化潜能 碱性磷酸酶的表达 胚胎阶段特异性细胞表面抗原的表达 ES细胞形态结构及核型 (1) 各种动物的ES细胞具有与早期胚胎细胞相似的形态结构，胞体体积小，核大，有一个或几个核仁。 (2) ES细胞与卵圆柱期（egg cylinder stage）胚胎外胚层和胎儿生殖脊的原始生殖细胞类似。 (3) 细胞中多为常染色质，胞质结构简单，散布着大量核糖体和线粒体，核型正常，保留了整倍体性质。正常ES细胞染色体正常，如发生异常则其很难发育分化形成动物个体。 ES细胞的高度分化潜能 ES细胞的全能性是其区别于成纤维细胞等体细胞的显著特点 (1) ES细胞在体外需在饲养层细胞上培养才能维持其未分化状态，一旦脱离饲养层就自发地进行分化。 (2) 在单层培养时细胞自发分化成多种细胞，悬浮培养中： “简单类胚体” ? “囊状胚体” ?细胞分化物。 碱性磷酸酶的表达 许多资料表明，小鼠、大鼠的桑椹胚细胞和囊胚细胞均有碱性磷酸酶（AKP）表达，小鼠的EC细胞和ES细胞中均含有丰富的AKP。而在已分化的EC细胞和ES细胞中AKP呈弱阳性或阴性。猪、兔的桑椹胚和早期囊胚AKP呈阳性。因此，AKP常用来作为鉴定EC细胞或ES细胞分化与否的标志之一。 胚胎阶段特异性细胞表面抗原的表达 早期胚胎细胞表面均表达胚胎阶段特异性表面抗原（SSEA－1）。在胚胎的原始外胚层细胞、ES细胞、EC细胞和原始生殖细胞的表面均可检测到SSEA－1的表达。小鼠SSEA－1的表达自8细胞期开始，直到原始外胚层形成期。早期囊胚ICM细胞全部呈强阳性，晚期囊胚中部分ICM呈强阳性，部分呈弱阳性，少部分为阴性。因此，SS