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肝干细胞移植治疗终末期肝病的进展 　　作者：潘德盛，蔡兵 作者单位：(南京医科大学附属无锡市人民医院 肝胆外科，江苏 无锡 214000) 　　【摘要】 近年来，肝干细胞的研究成为全球研究人员所关注的热点，并为各种终末期肝病的治疗开辟了崭新的思路。本文就肝干细胞的来源及其在治疗终末期肝病中的临床应用，以及相关前沿、存在问题和展望作一综述。 　　【关键词】 肝干细胞;肝衰竭;移植;终末期肝病;综述文献 　　同种异体肝移植仍是目前治疗终末期肝病的唯一有效方法，但面临着肝源缺乏、免疫排斥等问题。成熟肝细胞移植已应用于肝脏急性损伤、肝脏先天性疾病，并为等待供肝的患者提供过渡性治疗，然而成熟肝细胞移植仍在临床试验中进行评估，且远期效果有待观察。近年来，肝干细胞移植的出现为肝病的治疗提供了新的思路，虽然肝源的缺乏同样影响供移植干细胞的获得，但多种其他来源的干细胞可诱导其分化成为肝细胞，从而较好地解决了来源短缺的问题，为肝细胞移植和生物人工肝提供了丰富的细胞来源。在急、慢性肝衰竭、肝硬化和代谢性肝疾病的临床研究中，肝干细胞移植取得了令人满意的成绩，但某些问题如肝干细胞体外分离培养和鉴定、分化演变的调控机制及相关因子的作用机制、如何避免肝干细胞向肝癌细胞方向恶变、肝干细胞移植临床疗效评价等仍需进一步探索。 　　1 干细胞 　　自从1998年Wisconsin Madison大学的James Thomson教授[1]发现胚胎干细胞以来，胚胎干细胞技术在细胞生物学界引起了又一次革命。除了胚胎干细胞，器官特异性成体干细胞也具有一定程度的自我更新和可塑性。这给众多疾病的治疗带来了希望，在再生医学开创了一个新的领域。而最近日本研究人员将人体细胞进行重编程，诱导形成的多能干细胞和胚胎干细胞的功能相差无几，称为诱导多能干细胞[2-4](induced pluripotent stem cell，IPS细胞)，相信IPS细胞将会成为又一研究热点。 　　2 肝干细胞的存在 　　成体肝脏中是否存在肝干细胞?这个疑问最早由Wilson和Leduc[5]在1958年提出。直到近些年在啮齿动物肝脏的研究中才证实了肝干细胞的存在，并且认为肝干细胞是多源性的。肝干细胞是一类具有双向分化潜能的不成熟细胞，同样具有干细胞的一些生物学特性：①强大的增殖、更新潜能;②双向分化潜能，即可以分化成肝细胞和胆管上皮细胞。有文献报道，肝干细胞同时具有多向分化潜能，即可横向分化为其他组织。Yang等[6]将肝干细胞在高糖环境中培养，证实肝干细胞可以跨胚层分化为胰岛细胞，并能聚集成三维胰岛细胞样集落，葡萄糖刺激该细胞，可合成和分泌胰岛素。同时，将肝干细胞在体内移植到胰腺，可分化成胰腺细胞，移植到十二指肠，可分化为肠上皮细胞，其原因可能与局部微环境密切相关。根据其来源，可将肝干细胞分为肝源性肝干细胞和非肝源性肝干细胞。前者主要包括肝细胞、卵圆细胞、小肝细胞，后者主要有胚胎干细胞、骨髓干细胞等。 　　2.1 肝细胞 肝细胞一直被认为是一种终末分化的细胞，不具有或仅具有有限的增殖能力。然而这一观念被Zimmermann[7]所修正，他指出肝细胞在恰当刺激和肝受损时可被激活，并且具有归巢能力，有巨大的增殖潜能。 　　2.2 卵圆细胞 在肝损伤动物模型的实验中，发现当肝脏受到适当刺激和(或)受损时，剩余的肝细胞可被激活，并代偿地增殖，显示出强大的干细胞样增殖能力。有研究提出，休眠状态的肝干细胞有其自身的反馈系统，这种反馈能力来源于：①卵圆细胞(oval cell，OC)的激活。研究证实在移行胆管细胞和(或)终末小胆管形成的Hering管中存在一种内源性肝干细胞，体积小，核大，呈卵圆形，胞浆少且浅染，称之为OC或肝前体细胞。OC表达前体细胞所具有的AFP表型标志外，还表达肝细胞(如albumin)、胆管细胞(如CK?19)的表型标志，比较有趣的是OC也同时表达CD34、c?kit、Thy?1、sca?1等骨髓干细胞标志物[8]。因此，研究人员猜测卵圆细胞并非来源于肝脏，而是骨髓干细胞被活化后迁移至肝脏，参与肝脏损伤的修复。Gondon等[9]将从动物肝损伤模型分离得到的细胞经过短期的培养后移植入大鼠肝内，发现在体外培养过程中并不增殖的细胞在肝内迅速增殖并分化为成熟肝细胞。我国学者单云峰、周伟平等[10]利用2?乙酰氨基芴/部分肝切除建立肝卵圆细胞活化的大鼠模型，采用选择性消化法从该模型中分离纯化肝卵圆细胞，并做免疫细胞荧光鉴定，证实分离到的细胞为肝卵圆细胞，并且具有肝干细胞的特征。②骨髓/造血干细胞的转化。有研究证据显示在大鼠肝再生模型中骨髓/造血干细胞参与了肝再生过程并可转化为肝卵圆细胞、肝细胞和胆管细胞[11]。Peterse