癌痛消方中活血化瘀药对肝癌血液流变学和肿瘤血管密度的影响及研究.pdfVIP

第九次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 癌痛消方中活血化瘀药对肝癌血液流变学和肿瘤 血管密度影响的研究 韦艾凌 王书杰 张永琴 陆海颂 林元佳 韩海涛 湖南中医药大学(长沙，410004) 2．广西中医学院第一附属医院(南宁，530032) 肿瘤的发生和转移与肿瘤细胞所处的内外环境有着密切关系，肿瘤与环境既是相互依 存、促进，又是相互拮抗、斗争的关系，这是现代肿瘤生物学的一个关键和核心的问题。肝 癌之所以生命力顽强，是因为有一个适应其生存的肿瘤微环境(tumormicroenvironment)， 表现在肝癌荷瘤机体处于一种血液高凝状态，肝癌细胞制造的这种状态下，使得血管通透性 增加，血液浓缩，血细胞压积增加，血液失去流动性，致使微循环障碍，促进血管内凝血 的发生，而瘀血证普遍存在。瘀血症致使肝癌组织缺血缺氧。缺氧能引起血管新生，刺激肝 癌细胞的增殖；缺血导致肿瘤细胞营养贫瘠而限制其发展时，做为优势种群的肿瘤细胞便会 扩散(或转移)。而癌痛消方源自膈下逐瘀汤，经临床、实验检验证实有良好抗肝癌疗效， 其中运用大量活血化瘀药物以改善肝癌瘀血症，但有学者认为活血化瘀药物可促进肿瘤的转 移，致使临床上治疗肿瘤应用活血化瘀药物存有疑虑。本课题研究目的在于探讨癌痛消方中 活血化瘀药通过改善肝癌血液流变学及对肿瘤血管密度的影响，以明确癌痛消方中活血化瘀 药物抗肝癌的疗效机制。 t材料与方法 1．1材料 断奶Wistar雄性大鼠4只，体重60-809，用于癌细胞增殖传代。均购于广西实验动物中 心[动物生产合格证号：scxk(桂)2009—0002]。 培养物保藏中心。 第九次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 1．1．3药物组成活血化瘀药：赤芍309、红花69、乌药lOg、香附lOg、三棱lOg、莪术 上药物由广西中医学院百年乐制药厂按比例炼制成溶剂，放置于4C冰箱保存备用。 1．1．4主要试剂即用型SP法免疫组化检测试剂盒(批号PV-6001)、鼠抗人CD34单克隆 抗体(批号ZM-0046)，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 公司BV-100全自动血粘度仪。 1．2方法 r／min的速度 1．2．1造模参照文献方法，抽取二次传代后幼鼠的癌性腹水5mL，以1200 离心2min，弃上清液，用生理盐水洗涤、离心1次，取稀糊状浓缩的瘤细胞悬液备用。实验 用Wistar大鼠术前禁食12h，2％戊巴比妥钠按40mg／kg剂量腹腔注射麻醉。麻醉成功后取 仰卧位，固定消毒后，自剑突下沿腹白线逐层切开约1．5cm，暴露大鼠腹腔，轻压大鼠胸腔， 托出肝左外叶。用0．25mL注射器先抽取空气0．1mL再使注射器垂直，抽取浓缩的瘤细胞悬 液0．05mL(细胞计数约5×10个)，针头与肝脏表面呈30。角斜刺入鼠肝左外叶约0．5’0．8cm， 缓慢注入瘤细胞悬液0．05mL后继续推入空气0．03mL，快速拔针并于穿刺点予以凝胶止血海 绵填塞15s，观察无活动性出血后轻送肝脏还纳腹腔，关腹。术后3天注射青霉素[10万 U／(只·天)，肌注]。于造模第7天随机抽取6只大鼠处死取肝脏，与正常组大鼠(5只) 通过病理组织学检查对照，证实成模。 1．2．2分组及给药模型动物按比例随机分为4组，癌痛消全方组、活血化瘀药组、非活血 化瘀药组和模型组，每组10只。于造模后第8天开始，分别给予癌痛消全方溶剂、活血化 瘀药溶剂、非活血化瘀药溶剂兑换成的药液(均以人体等效剂量按10m1·kg·d灌胃)，模 型组给予等量生理盐水，每日2次，连续给药14d。停药24h后，心脏穿刺采血后处死所有 gm。 动物，取出适量瘤块，置于4％多聚甲醛溶液中固定，石蜡包埋，进行连续石蜡切片，厚度4 1．2．3血液流变性测定处死大鼠前，行心脏穿刺采血2—3ml，枸橼酸钠抗凝，不能凝血或 溶血。急送病检科，使用全自动血粘度仪于37℃测定全血粘度、血浆粘度、血沉方程K值。 温氏法测红细胞压积。 1．2．4免疫组化染色CD34单抗按SP法进行免疫组化染色，具体操作严格按试剂盒说明 第九次全国中西医结合血瘀证及活