油砂山油田本源微生物分子生物学初步调查.pdfVIP

82 第24卷 第5期 大庆石油地质与开发P-G．O．D．D．2005年10月 文章编号：1000·3754(2005)05J0082旬2 油砂山油田本源微生物分子生物学初步调查 佘跃惠1，何正国2，杨柳岸3，张凡1，周玲革1，舒福昌1，向廷生1 摘要：采用细菌通用引物和古细菌引物对青海油砂山油田178井本源微生物样品DNA进行扩增，构建 基因文库，克隆和DNA序列分析。将测序结果与基因银行进行比对结果表明，油砂山样品中有大量 海杆菌属和甲胞茵属，样品中还发现存在产甲烷古茵及一些不可培养的其它古茵类群。它们的功能和 多样性有待于深入研究，以便进一步筛选用于提高该油田原油采收率的采油功能菌群。 关键词：油砂山油田；本源微生物；基因文库；多样性 中图分类号：TE357 文献标识码：A 构建16SrDNA克隆文库是微生物分子生态学中 用来调查环境中原核微生物组成的常用方法之一。 成像UV系统。 1990年，Giovannoni等…首先用这一方法分析马尾藻(3)16SrRNA基因PCR扩增引物旧1 GTT TCCTGGCTCAG一3 海上浮游微生物的多样性，因为这一方法不需要得到 TGA 细菌F：5-AGA 环境中微生物的纯培养，突破了用传统微生物分离纯 TACCrItIGTTACGACTT一3 细菌R：5一GGT TCCTGCCRG-3 化的方法调查环境中微生物多样性时很多微生物无法 GGTTGA 古菌F：5一TCC 得到纯培养的限制，因此这一方法目前已经被广泛运 TACCrItIGrITI’ACGACTT-3 古菌R：5一GGT 用于土壤、海洋、湖泊、肠道等多种生态系统中微生 1．2实验步骤 物多样性的调查，并且揭示前所未知的环境中微生物 1．2．1 样品总基因组DNA的提取 的多样性。 无菌条件下取100mL油砂山油、水样品用定性 为了调查青海油田本源微生物种群结构，寻找采 滤纸过滤除去样品中的悬浮颗粒，收集滤液，滤液通 油优势功能菌群，特别是能够深入了解存在但目前尚 过聚碳酸酯膜(0．22斗m，47mm)真空过滤，滤膜 不能培养的微生物类群，设计了两套分别对应细菌和 用无菌缓冲液冲洗两次。将滤膜取出剪成碎片装人 古菌的引物，采用PcR方法直接从油田环境样品扩 10 增其微生物的16SrRNA基因，然后构建基因文库，37℃温育1h后加入115肛L 克隆并进行DNA序列分析，最后用获得的基因序列 m∥mL)温育2 斗l蛋白酶K(20 h，加入400卜L的 在GenBank中查找与其对应的微生物种类。这对于 5 M 研究油藏条件下本源微生物生态，发现和培养新的微 280灿LCTAB溶液，65℃温育20 生物，以及筛选采油优势功能菌具有重要意义。 用标准的酚一氯仿方法进行纯化。取上清加入0．6倍 000