酵母准备试剂.docVIP

酵母转化 材料、仪器设备及试剂： 0.2% stock solution 的 L-Adenine Hemisulphate：0.2g+100ml的ddH20，分2支 用时灭菌。 2.YPDA培养基： 1L 胰蛋白胨 20g/L 酵母提取物 10g/L 葡萄糖 20g/L 腺嘌呤 15ml 0.2% stock solution 调节pH =7.5，121°灭菌15min 3.YPDA培养基 （用时再分装灭菌）YPDA Liquid (1 L) Reagent Amount YPD 50 g L-Adenine Hemisulphate 15 ml of 0.2% stock solution Deionized water Up to 1 L Adjust pH to 6.5 if necessary, then autoclave. 3. YPDA Agar培养板(1 L) Reagent Amount YPD agar 70 g L-adenine hemisulphate 15 ml of 0.2% stock solution Deionized water Up to 1 L Adjust pH to 6.5 if necessary, then autoclave. 4.0.9%NaCl（w/v）（科室拿） 1ml:EP管分装 NaCl: 0.9g milipore水 定容到100ml 灭菌121°，20min 5.100%DMSO 从试剂瓶中分装到ep管中，500ul每管，室温保存 6. 10×TE（pH=7.5）： （0.1M Tris-HCl，10mM EDTA） Tris-HCl 1.211g/100ml EDTA 0.37g/100ml 调节pH=7.5, 121°，20min 10×LiAc（pH=7.5） 1M LiAc 10.202g/100ml 用醋酸调节pH=7.5，121°灭菌20min 1.1×TE/LiAc 1.1ml的10×TE + 1.1ml的 10×LiAc 加入灭菌水终为10ml 50% PEG3350： PEG3350： 50g 已灭菌的milipore水： 定容到100m （可用50°水浴助溶，PEG易吸水，不可灭菌） PEG/LiAc：现配现用，在超净台中操作，吸取母液到ep管或50ml离心管中 终浓度 10ml PEG3350 40% 8ml 50%PEG3350 TE buffer 1× 1ml 10×TE LiAc 1× 1ml 10×LiAc 变性的鲱鱼精DNA(10mg/ml)： 100° 5min 变性 milipore水，70%酒精棉球，50ml离心管4个，ep管一盒，15ml试管架，50ml试管架，ep管架 6..x-a-GAL用 DMF（dimethyl formamide） 20mg/ml， Prepare and autoclave 1 L of the appropriate droput agar medium Cool to 55°C Add 2 ml of X-a-Gal (20 mg/ml) Spreading onto premade agar plates Dilute X-a-Gal to 4 mg/ml in dimethyl formamide Spread 200 μl onto 15 cm plates, or 100 μl onto 10 cm plates using sterile glass beads 具体方法： Freezing Medium consists of YPD liquid medium + 25% glycerol A：酵母感受态制备 从平板上或保种管中，挑少许酵母，在YPDA平板上划单克隆（10ul+10ul的DDH20），30°培养3天左右。 从平板上分别挑取单克隆（直径2-3mm）到含有3ml YPDA的玻璃试管中（平行做3管） 30°，200rpm，培养8-12h （过夜） 取200ul 菌液，测OD600 选取OD600值最大的一个试管（即活力最高的一个），吸取5ul转移至50m新鲜的YPDA培养基中（培养基装在250ml三角瓶中） ？？？剩下的离心制作甘油菌 30°，200rpm，培养16-20h，直至OD600=0.15-0.3 将培养好的菌液转入2个50ml离心管，室温离心3000g，3min，弃上清，用100ml新鲜的YPDA悬起管底的菌体，并倒入干净的三角瓶中。 30°，200