K-Ras基因突变检测方法进展.pdfVIP

· 1496 · 广东医学 2011年6月第32卷第 11期 GuangdongMedicalJournalJune．2011，Vo1．32，No．11 K—Ras基 因突变检测方法进展 毕媛 ，王捷 广州军区广州总医院医学实验科(广州 510010) 近年来，靶向药物的问世 ，使肿瘤治疗进步明显。靶向 3 K—Ras基因状态常用检测方法 药物单药或联合化疗药物的使用 ，不仅可以延长患者 的生存 3．1 限制性酶切片段长度多态性分析法(RFLP) 该法是 期 ，更可明显提高患者的生活质量。西妥昔单抗 (Cetux— 检测 DNA在 限制性 内切酶酶切后形成的特定 DNA片段 的 imab)是一种靶向作用于表皮生长因子受体 (EGFR)的单克 大小，反映DNA分子上不同酶切位点的分布情况 ，因此 DNA 隆抗体 。通过与EGFR细胞外位点结合，竞争性地抑制其与 序列上的微小变化，能引起限制性 内切酶切点的丢失或产 自然配体的结合，从而阻断下游信号转导，起到抑制肿瘤生 生，导致酶切片段长度的变化。RFLP标记的等位基因具有 长及转移的作用。此外，西妥昔单抗还能诱发抗体依赖细胞 共显性的特点，结果稳定可靠，重复性好，特剐适应于构建遗 介导的细胞毒作用(ADCC)，进一步杀死肿瘤细胞。但该治 传连锁 图 。优点：(1)不需要特殊的设备；(2)便宜。缺 疗药物并不是对所有患者有效，其治疗效果与肿瘤患者体内 点：(1)经常需要用测序法确认；(2)不能确定特殊的突变； K—Ras基 因突变状 态有关。根据 K—Ras基 因状态不仅可 (3)不能定量 。 以合理地选择抗肿瘤药物，预测肿瘤治疗靶 向药物 (抗 EG— 3．2 单链构象多态性分析法 (sscP) 该法是一种灵敏快 FR抗体等)的疗效 ，也可以预测常规化疗中常用的5一氟 速简单的检测DNA突变的方法，该法原理为：DNA碱基序列 尿 嘧啶治疗效果 -4j。 目前检测 K—Ras基 因突变的方法很 决定DNA的构象，而构象又决定DNA单链的电泳行为，所 多，但是效果差别很大，若不能清楚地了解各方法的优缺点， 以通过 DNA单链的电泳图谱可以反映 DNA的碱基序列。 对 K—Ras基因突变的准确检测造成相对较大的困难。本文 PCR引入该法后 ，使该法更为灵敏 。样 品经 PCR扩增后 ，其 针对这一现状，介绍并对比K—Ras基 因突变检测的常用方 产物经变性后可以产生2条单链，如果存在基因突变，单链 法 ，列出各检测方法的优缺点，以期对 K—Ras基 因突变检测 的构象会发生变化，正常与突变的DNA单链在聚丙烯酰胺 方法的选择起一定的指导作用，帮助实现肿瘤的个体化治 凝胶 电泳(PAGE)中，可以显现出不同的带型，从而确定野生 疗。 型和突变型。优点：(1)不需要特殊的设备；(2)简便、快速、 1 K—Ras基因及其突变 灵敏 。缺点：(1)只能作为一种 突变检测方法，要最后确定 人类大多数细胞 中都表达 Ras基 因，其家族有3个成 突变的位置和类型，需要进一步测序；(2)电泳务件要求较 严格 。 员，分别为 H—Ras、N—Ras、K—Ras。其 中K—ras基 因位于 人类基因12号染色体P12．1，含有4个编码外显子和 1个5 3．3 DNA直接测序法 把待测序的DNA分子进行处理，得