交联法固定化米曲霉菌体光学拆分DL-色氨酸的研究.pdfVIP

维普资讯 交联法 固定化米 曲霉菌体光学拆分 DL一色氨酸 的研究 曹 飞 石开风 周 华 韦 萍 (南京212业大学制药与生命科学学院，南京 ，210009) 摘 要 采用戊二醛作交联剂 ，对米 曲霉 3042产氨基酰化酶液态发酵菌体进行 固定化 ，固定化酶活保 留率最 高达到 30．4％。固定化米 曲霉菌体扫描 电镜 图可看 出，通过 固定化后菌体之 间结合紧密程度提高 ，有利于米 曲 酰化酶附着在菌体上。对 固定化米曲霉菌体分批拆分制备 L一色氨酸进行 了研究，固定化菌体酶活的半衰期约 为 27d。 关键词 米 曲霉菌体 ，固定化 ，L一色氨酸 KenichiHirano等 ¨J用清蛋 白和戊 二醛 固定化 针对不同的包埋剂对菌体进行包埋 ，具体方法可 产氨基酰化酶 Aspergillusochraceus菌球 ，开始 了固 参考居乃琥等的实验方法 |6J。 定化菌体氨基酰化酶拆分 DL一氨基酸的研究。宋正 1．2、4 酶 活测 定方法 【J 孝等 J通过液态培养米 曲霉 3042得 到直径 1～ 酶活测定 ：取湿菌体 1g，加入 pH7．0的磷酸缓 2mm 的菌球 ，用明胶 一甲醛为交联剂交联 固定化菌 冲液 1OmL，再加入 0．1otol／LN一乙酰一DL一色氨酸 球拆分 DL一丙氨酸的研究 。但到 目前为止 ，尚未见 (以下简称 N_Ac—DL—Trp)溶 液 10mL，37℃振荡反 固定化细胞拆分制备 L一色氨酸的报道。本实验室 应2h，加热使酶失活 ，采用二盐酸萘 乙二胺显色法测 在实现 了米 曲霉 3042液态培养 高产氨基酰化酶 定拆分出的 L一色氨酸 (以下简称 L—Trp)的 otol数 。 后 J，尝试了对液态培养获得 的含氨基酰化酶活高 酶活定 义：在 37℃下 1h酶水 解反 应催 化产生 的菌丝体进行 固定化 ，并对 固定化米 曲霉菌体拆分 1tLmolL—Trp为 1个酶活单位。 N 一乙酰 一DL一色氨酸进行了研究。 2 结果与讨论 1 材料与方法 2、1 菌体 固定化方法的选择 1．1 试剂与仪器 米 曲霉菌体 固定化主要采用包埋法和交联法。 聚乙烯多胺 、戊二醛 、海藻酸钠 、卡拉胶 、明胶、聚 分别用 8种不同的载体进行米曲霉菌体 固定化 ，固定 乙烯醇 、丙烯酰胺 (生化级 ，中国医药集团上海化学试 化酶活性回收情况见表 1。 剂公 司)。 表 1 米 曲霉菌体 固定化方法选择 搅拌式生物反应器 (WB一11-1．5L，江苏绿环生化 工程公司)；高效毛细管 电泳 (P／ACE system 5000， Beckman公 司)；旋光仪 (P一1020，日本分光株 式会 社)；扫描 电镜 (JSM 一5900，日本 电子株式会社 )。 1、2 方 法 1．2、1 菌体预处理 将发酵后的菌体放人 0．9％生理盐水 中浸泡 30 rain，真空抽滤 ，用搅拌器分散菌体 。 在 固定化载体的筛选中，常用的包埋载体固定化 1．2．2 交联法 固定化菌体 后酶活都很 低，均不超过 10％。而采 用戊二醛 交联 将处理过的菌体加入一定浓度 的交联剂溶液中， 的菌体酶活 回收率最高 ，为 28．7％。这可能与米 曲 在室温中不断地摇匀 ，进行 交联一定 时间，将 交联后 酰化酶位点有关 ，米曲酰化酶大部分处于菌体胞壁传 菌体抽滤，用蒸馏水洗去残 留的交联剂。