利用HyQSphere微载体从大体系中收集细胞.pdfVIP

利用HyQSphere微载体从大体系中收集细胞 此方法适用于HyQSphere FACT 102L, CGEN 102L, Pro-F 102L, P Plus 102L和P 102L微载体。 1.将200 mL培养物从培养箱转移到生 注意：为了能够收集到洁净且具有活 物安全柜中，静置使微载体沉降下 力的单细胞悬液，尽可能使用最低浓 来。避免细胞长时间缺氧。 度的胰蛋白酶或HyQTase：在孔板中 逐步滴加胰蛋白酶或HyQTase，浓度 2.微载体沉降后，吸出培养基。 范围从0.05%到0.25%。 3.向转瓶中加入50-100 mL Thermo 注意：在37℃，室温和更低温度（例 Scientific HyClone Dulbecco’s磷酸 如，10℃）下逐步滴加胰蛋白酶或 盐缓冲液（DPBS），无钙镁离子 HyQTase以确定收集具有活力的单细 （SH30028.03），充分清洗载满细 胞悬液的最适温度。最低的温度可能 胞的微载体，注意不要让液体大力冲 是保持细胞活力的最适温度。 击微载体，以免把细胞冲掉。 5.确定所需细胞类型能够耐受清洗用 a.室温下以40 rpm的转速搅拌培养物 的PBS。推荐组织培养DPBS。 约15分钟。 6.细胞从微载体上脱落后，用移液管 4.将第二次清洗用的DPBS除去后，加 温和地反复吹打微载体-细胞悬液，以 入25mL（或少一些）的胰蛋白酶 使细胞形成单细胞悬液。（此处使用 （SH30236）或HyQTase非哺乳动物 24-50 mL的移液管比较方便。对于更 细胞分离试剂（SV30030.01），40 大的体积，可以选择使用蠕动泵让微 rpm搅拌培养物15分钟。（可根据实 载 体 浆 在 无 菌 的 管 道 中 涡 旋 的 方 际温度调整时间。） 法。） 108