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嗜温性乳链球菌质粒的分离及其DNA 同源性的研究 黄道超 MadeleineNovel GeorgesNovel 法（国冈大学生物学应用研究院微生物遗传实验室） 分离10株嗜温性乳链球菌的质粒,DNA的电泳图表明，不同菌株中有2至9个质粒，其分子量从 2.8到80k6不等。用”p标记已知的质粒 pUCL22(55kb）和 pUCL22的1.3kb,4.4kbDNA片段分 子探针，分别与被研究的乳链球菌的质粒杂交，放射自显影结果证明，一些菌株的某些质粒与 pUCL22 探针和其DNA片段探针有同源性。质粒pUCL22探针检验出菌株L72,D47中的80kb的质粒，该 质粒在电泳图中没有看到。 关镇词：乳链球菌，质粒，乳搪质粒P2DNA一DNA杂交，同源 DNA 对乳链球菌质粒的研究，近几年来国外有 二（）菌株和细菌培养 乳链球菌C10,. 很多报道，但国内的报道却很少。乳链球菌存 C11,L22,L26,L32,C39,D44,D47,L48和L85 在于农畜产品中，在各种鲜乳和乳制品中尤其 来自巴黎法国国家农业研究院；乳链球菌 丰富。乳链球菌、乳酪链球菌等在乳品工业中 L72(ML3),L191(LM2301/pVA797)，分别由 作为发酵菌种被广泛应用。1976年Efstathiou 美国McKay、法国Mercenier惠赠。乳链球菌 等发现在乳链球菌 [Lactococcus(Streptoco- 7G是本实验室M.Novel和黄道超通过细菌 ccus)lactisssp.lactis]M18、C10和 ML3 接合而得到的一批菌株中的一株；乳链球菌25 中，分子量小的质粒控制乳中蛋白质的降解，而 Xh。是本实验室Baizet于 1986年获得的克 分子量较大的质粒则控制乳糖发酵191。木文报 隆菌株。 道我们对10株野生嗜温性乳链球菌t其中有5 全部乳链球菌培养于 M17培养液fi［ll，并 株乳链球菌 [Lactococcus(Streptococcus) 按0.5务加人乳糖，但对L191,7G则加人0.5多 lactisssp.lactis］简称L,3株乳酪链球菌L［a- 葡萄糖和按5pg/ml加人氯霉素，37℃水浴培 CtOCOCCUS(Streptococcus)lactisssp.cremo- 养至 OD61为 1.0-1.2，经5000Xg离心 10分 ris〕简称 C,2株丁二酮乳链球菌 L［actoco- 钟收集菌体。 ccus(Streptococcus)lactisssp,lactisvar. 三（）质粒的分离 采用文献[1]方法略 diacetylactis〕简称D，进行质粒分离，凝胶电 加改良，即将 DNA在0.5NNaCl中的反应延 泳的研究结果表明，不同菌株中存在着数量不 长 1小时，从而得到较纯、较多和较易被某些限 一、分子量不等的质粒。DNA-DNA 杂交法 制性内切酶切割的 cccDNA. 证明，被研究的乳链球菌质粒与已知质粒DNA （四）质粒 DNA 的纯化 分别采用 探针有同源性。 RNA酶消化法131和染料浮力密度梯度超离心 法L，‘。 材 料 和 方 法 一（）试荆 所用化学试剂购于法国 HuangDaochaoe:al.:IsolationandDNA Ho- BioMerieux、西德Merck公司和Sigma巴黎 mologyofPlasmidsfrom MesophilicLactic Streptococci 分公司。 本文于1988年5月7日收到，1989年3月8日修回。 图，A.嗜温性乳链球菌质粒DNA的电泳图；B,C,D和F分别为电泳后经Southern转移，与质粒pUCL22, pVA797,pUCL22的1.3k6和XhoI4.4k6DNA探针杂交的结果。详细说明见表1, 五（）