嗜盐古菌启动子DNA片段的功能检测.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # #$$ % #$! 年 月 日 #$$ ! ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! ’()* #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 嗜盐古菌启动子!# 片段的功能检测 ， 0 - # # - 0 黄玉屏 ，刘 鹏 ，刘 义 ，沈韫芬 ，沈 萍 0 # （武汉大学 生命科学学院 化学与分子科学学院 武汉 !-$$,# ） - （中国科学院水生生物研究所 武汉 !-$$,# ） 摘 要：将来源于嗜盐古菌染色体HI 的启动子片段 JK$, 或JK0- 插入到启动子探针载体 ’LMN5# 的报告基因 之前，通过 半乳糖苷酶酶活性的检测，进一步确证 和 片段在大肠杆菌（ ）中的启动 !#N 5 JK$, JK0- $%#’()#) #*!) ! 功能。同时用微量热技术检测了大肠杆菌 及其重组菌株在 培养基中 生长过程的热输出功率。 HO1 M/ -, P 2# （ ）、 （ ）、 （ ）、 （ ）和 （ ）菌株的生长速率分别比大肠杆菌 ’LMN5# 29$, ’LM,# 29$,5# ’LM,$# 290-0 ’LM0-0 290-# ’LM0-# HO1 降低了 、 、 、 和 。当启动子启动了基因表达时，菌株的生长速率显著降低，热力学参数 Q1 R 00R !0Q 0R !, Q1 R !# Q, R 与酶活性检测结果有较好的一致性。微量热结果表明基因的表达比质粒HI 的复制过程需要消耗更多的能量， 对细菌的生理代谢有较大改变。微量热技术为检测基因的表达和转录调控提供了新的方法和思路。 关键词：启动子；微量热技术；半乳糖苷酶基因；嗜盐古菌 5 ! 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） S,4 $$$05#$+ #$$ $#5$#$$5$1 启动子是HI 链上指导JI 聚合酶结合并起 记录生物体系代谢过程的热效应。微量热技术已经 始:JI 合成的HI 序列，是控制基因表达的重要 广泛用于微生物学研究，例如用于研究酵母代谢、食 ［］ ［，］ 部位0 。没有启动子， 就不能进行有效的转