噬菌体抗体库技术及其研究进展.pdfVIP

细胞生物学杂志 Chinese Journal of Cell Biology 2009, 31(5): 629634 噬菌体抗体库技术及其研究进展 杨乃娣　詹金彪* (浙江大学医学院生物化学与遗传学系,杭州310058) 摘要　　噬菌体抗体库技术将噬菌体展示技术与PCR技术相结合,在噬菌体表面成功表达抗 体可变区基因,从而得到多样性噬菌体抗体集合。目前,噬菌体抗体库技术逐渐成为获得人源性抗 体的主要手段之一,已有多株来源于噬菌体抗体库技术的单克隆抗体应用于临床。现就噬菌体抗 体库构建、筛选及应用作一综述。 关键词　　噬菌体抗体库;噬菌体展示 自1975年Köhler和Milstein创立淋巴细胞杂交 因组中,使外源DNA编码的肽段与噬菌体外壳蛋白 瘤技术至今,单克隆抗体的研究方兴未艾,单抗可以 形成融合蛋白,从而伸展到噬菌体表面。再采用与 应用于疾病诊断与治疗等多个领域。早期应用于人 固定配体相互作用的亲和筛选方法,可以富集得到能 类疾病治疗的主要是鼠源性单抗,但是鼠单抗通常半 表达某种特异肽序列的噬菌体。噬菌体(phage)和噬 [1] 菌粒(phagemid)都可作为表达载体来展示抗体或其他 衰期短 且作为异源蛋白会引起人体免疫反应,产生 [2] 蛋白。噬菌粒携带表达gⅢ外壳的基因、克隆位点 人抗鼠抗体 ,不能很好的发挥其生物学功能,因此 在临床应用中受到限制;后来,在鼠单抗基础上,改 及噬菌体包装信号,并由辅助噬菌体(如M13KO7或 造形成了嵌合式抗体和人源化抗体,但两者应用于人 VCS-M13)提供完成包装所需的结构蛋白。含有完 [3] 整噬菌体基因组的丝状噬菌体常用来构建肽库,而噬 体依旧存在免疫原性 ;目前,人们正致力于人源性 单克隆抗体的研究,主要采用噬菌体展示技术和转基 菌粒能够展示大量重组蛋白质,更易于产生可溶性蛋 因技术,由此产生的多株抗体已经应用于临床,如 白,同时自身不易受异源基因影响,因此在噬菌体抗 [9] 2006年美国最先批准了人源性单克隆抗体Panit- 体库构建中占据主导地位 。 [6] umumab商品名Vectibix)( 用于转移性结肠直肠癌的 抗体片段首次由McCafferty等 在噬菌体表面 [4] 成功展示,他们采用PCR方法扩增出完整的抗体可变 临床治疗 。 1989年英国剑桥Winter小组与Scripps研究所 区基因,将多样性的可变区基因与表达载体(如噬菌 Lerner小组创造性地采用PCR方法克隆机体全部抗 体或噬菌粒载体)相连后,转化宿主细胞,并最终表达 [5] 到噬菌体表面,从而得到多样性噬菌体抗体集合,即 体基因, 并重组于原核表达载体中 ;第二年, [6] 噬菌体抗体库。此后产生的抗体库均是在上述方法 McCafferty等 将该技术与噬菌体展示技术(phage display)结合起来,在噬菌体表面成功表达抗体可变区 的基础上构建而成,图1展示了人源性噬菌体抗体库 [6,10] 基因,构建了噬菌体抗体库。噬菌体抗体库可以对 的构建过程 。将构建好的噬菌体抗体库与目的 各种抗原进行高通量筛选,且可快速获得抗体片段,并 抗原、细胞或组织共同温育,通过 “吸附-洗脱- 易于改造,因而获得广泛应用。据统计,应用于临 扩增”的淘筛过程(panning),可筛选出特异性抗 床的单克