蛋白质组学实验中聚丙烯酰胺凝胶考马斯亮蓝染色.pdfVIP

维普资讯 蛋 白质组学实验中 聚丙烯酰胺凝胶 的 考马斯亮蓝染色 应天翼 任趱n质鳃 实验 II’赞n质绦聚 爆溉l臌凝睃 泳后 染色足 一个十 分眼要瓣环节。 j： 瞧好 质 染 性 操f{：i：的馁捷，考 斯毙 染色 足 前众多实验 f·蛾常 瓣染色办法。本文介缭r 种街具特色 学t与斯 毙 染 法。 蛋 白质 电泳后聚丙烯酰胺凝胶 的染 该方法可以检测到 8～10ng蛋 白质 ，线性 色是非常重要 的步骤 ，而考马斯亮蓝染 动态范围约 10～30倍 ，所 以推荐在蛋 白质 乍者简介 色可 以说是 目前使用最为广泛 的一种方 组学实验 中使用。。下面将介绍4种考马斯 应天翼 ，本科毕业于上海交通大学生 法。考 马斯亮蓝染色主要具有 以下一些 亮蓝染色 的实验方法 以满足实验的需要 。 D化学工程专业 ，博士毕业于军事医学科 优点 ：一是实验成本 低且不 需配备 昂贵 ±院遗传学专业。近年来 直从事蛋白质 |学及相关领域的研究工作，研究内容涉 的扫描设备 (相对于荧光染色法而言)： 一 般注意事项 多种革兰阴性菌、革兰阳性菌、病毒、细 二是实验方案很多 ，可 以根据 自己的需 、 组织等生物样 品的蛋 白质表达谱 、比 要在操作简便与高灵敏度之间进行选择 (1)尽量使用高质量 的水 。 蛋白质组学、免疫蛋白质组学等方面 。 双向凝胶 电泳、生物质谱等技术有较为 三是线性动态 范围比银染色法宽 ，适于 (2)尽量使用高质量 的试剂。 八的研究。 进行定量分析 四是与质谱的兼容 性好。 (3)不要用手触摸凝胶 ，即使戴手套 常用的考马斯 亮蓝主要有 R一250和 也要尽量避免 。 ∈键词 G一250两种 ，R一250的水溶性强于后者 ，所 (4)将染色槽密封好 ，避免 因有机溶 蛋 白质组学 ；考马斯亮蓝染色 以后者常用于胶体考马斯亮蓝染色。一 剂的挥发而影响染色效果 。 般来说实验室最常用的是 R一250，在醇 ／ (5)将脱色槽密封好 ，避免外源蛋 白 )参考文献 酸 的体系 中染色和脱色 ，此时染料同蛋 质 的进入 。 W alkerJ M TheProtein Protocols andbook New Jersey：HumanaPressInc， 白质的结合能力强 ，同凝 胶基质 的结合 )02 能力弱 ，所 以脱色 时很容 易将结合在蛋 4种考马斯亮蓝染色的实验方法 白质上的染料洗脱 下来 。这样就会对实 》参考文献 GarfinD，AhujaSHandbookofIsoelec一 验的重复性造成一定的影响，并且 由于 1．快速加热染色法0 c【FocusingandProteomics ElsevierAca一 灵敏度不高 ，所 以不推荐 在需要 定量分 (1)取250rag考