2013届高考生物第一轮高频考点复习课件4.ppt

4．细菌分离与计数的实验流程 土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物培养→观察并记录结果→细菌计数。 【例2】可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是(　　) A．以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂 B．以尿素为惟一氮源的培养基中加入二苯胺试剂 C．以尿素为惟一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂 D．以尿素为惟一氮源的培养基中加入双缩脲试剂 【解析】在以尿素为惟一氮源的培养基中，不能分解尿素获得氮源的细菌不能生长，而分解尿素的细菌能利用尿素作氮源，将尿素分解为氨，使pH升高。若培养基中加入酚红指示剂，指示剂将变红。此培养基既属于选择培养基，又属于鉴别培养基。 A 三、分解纤维素的微生物的分离 1．分解纤维素的微生物的分离 (1)实验原理 即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 (2)实验流程 土壤取样：富含纤维素的环境。 ↓ 选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的数量。 ↓ 梯度稀释 ↓ 涂布平板：将样品涂布于鉴别含CR的纤维素分解菌的培养基(固体)。 ↓ 挑选产生透明圈的菌落：产生纤维素酶的菌落周围出现透明圈。 2．两种刚果红染色法的比较 方法 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，过程如下：培养基经涂布培养长出菌落→覆盖质量浓度为1 mg/mL的CR溶液 倒去CR溶液→加入物质的量浓度为1 mol/L的NaCl溶液 倒掉NaCl溶液→出现透明圈 方法二：倒平板时就加入刚果红，过程如下：配制质量浓度为10 mg/mL的CR溶液→灭菌→按照每200 mL培养基加入1 mL的比例加入CR溶液→混匀→倒平板→接种后培养→出现透明圈 优点 显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作简便，不存在菌落的混杂问题 方法 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，过程如下：培养基经涂布培养长出菌落→覆盖质量浓度为1 mg/mL的CR溶液 倒去CR溶液→加入物质的量浓度为1 mol/L的NaCl溶液 倒掉NaCl溶液→出现透明圈 方法二：倒平板时就加入刚果红，过程如下：配制质量浓度为10 mg/mL的CR溶液→灭菌→按照每200 mL培养基加入1 mL的比例加入CR溶液→混匀→倒平板→接种后培养→出现透明圈 缺点 操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂 (1)由于纤维素、琼脂和土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应； (2)有些微生物具有降解色素的能力，长时间培养会降解刚果红，从而形成明显的透明圈，这些微生物与纤维素分解菌不易区分 【友情提醒】①选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度，确保能够从样品中分离到所需要的微生物。 ②涉及的微生物技术主要有：培养基的配制、无菌操作技术、稀释涂布平板法、选择培养基的作用、土壤取样等。 【例3】下图为分离并统计分解纤维素的微生物的实验流程，据此回答有关问题： (1)要从富含纤维素的环境中分离纤维素分解菌，从高温热泉中寻找耐热菌，这说明______________。 (2)某同学根据需要，配制了纤维素分解菌的培养基如下，整个实验过程严格执行无菌操作。 如果将其中的纤维素粉换成________，菌落数____________________________________________， 即可说明选择培养基的作用。 纤维素粉 NaNO3 Na2HPO4 KH2PO4 5 g 1 g 1.2 g 0.9 g MgSO4·7H2O KCl 酵母膏 0.5 g 0.5 g 适量 【解析】(1)因为纤维素分解菌与耐热菌有不同的生活习性，生活在不同的环境中，故要根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 (2)因为葡萄糖是纤维素水解产生的、能被微生物直接利用的有机小分子，所以如果将其中的纤维素粉换成葡萄糖，纤维素分解菌及其他细菌会生长繁殖得更快，故菌落数明显多于选择培养基。 (3)因为稀释涂布平板法要将菌液进行一系列的梯度稀释，故该法可根据稀释体积计算每克样品中的细菌数，而平板划线法则不能这样，所以本实验宜采用稀释涂布平板法。 【答案】(1)不同的菌株生活在不同的环境中，根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找　 (2)葡萄糖　明显多于选择培养基上的菌落数　 (3)稀释涂布平板　平板划线法难以根据稀释