液相色谱质谱操作步骤.doc

液相色谱质谱操作步骤 开机 将废气管放入窗外； 将氮气罐拧开（氮气总压不能低于2MPa）,氮气时候足够，注意氮气分压表压力大概在0.6MP左右； 打开电脑，进行自检； 打开液相自动进样器，自检后绿灯亮即可完成自检； 打开泵电源 接着打开质谱，自检3分钟，听见两次声响后自检成功； 打开masslynx软件后，抽真空4小时左右，直到真空值为e-5次方，即可使用； 调谐 抽好真空后，准备调谐； 建立个人“Project”：在Masslynx 界面点File-Project wizard点yes，输入名称，选择建立新的Project； 进行质谱调谐。在TQ Detector软件中单击API加氮气，然后调源温度（参考80），去溶剂温度（参考300），点击软件右下角I图标加电压。等到温度升到设定值后，在Fluidics中设定参数，调谐前，FLOW STATE 先选择waste对管路进行清洗（单击purge the Fluidics system）；清洗完毕后，FLOW STATE中选择infusion，在Analyser中设定参数：如果选择单MS则参数为15，15，1，Entrance 50，Collision 2，Exit50，并在软件右侧选择母离子扫描，点击start进行调谐，改变cone的电压值，使选择的峰信号达到最高，即达到最优值；若果选择MS-MS扫描，要先打开氩气，参数为13，13，0.5，Entrance -2，Collision-2，Exit 2，点击start进行调谐，点status infusion出现信号，选择子离子扫描，固定corn的电压值，改变collision，使目标峰达到最高即达到最优值。达到最优值后进行采集，改变DATA 和MASSES参数打开一个色谱图，点小闹钟，在出现的色谱图上点鼠标左键水平向右拖动鼠标，可得到采集母离子或者子离子信息。要进行下次采集时先关闭上次采集。保存好调谐方法到个人的Project中； 调谐完毕后用溶剂清洗管路，在Fluidics中设定FLOW STATE择waste，点击purge the Fluidics system，设流速放空洗液。洗完后先关电压（右下角圆环），降温，温度下降到设定值后关闭氮气； 方法编辑及测定 分别点击inlet method和mass method编液相和质谱的方法。编好后分别将该文件存到Project中；（注意：液相时间应与质谱时间一致） 编辑样品序列：先建立个人“project”，在最初的界面instrument中输入样品名，瓶号，进样量，然后分别调出液相方法与质谱方法； 在操作平台中打开mass console，在Acquity uplc sysytem中选择control下拉菜单中start up system选择A（纯有机相），B(纯水相)流动相进行系统清洗（一般清洗4个循环，流速8ml/min大约10分钟）； 做样前，一般设定0.1ml/min流速平衡色谱柱及系统，先用建好的液相方法平衡柱子，在点Inlet method，界面中选LC-Load Method ，观察Delta值小于50方可开始测试样品（若使用缓冲盐则应小于10）。选中序列中要进的样，点击start出现start list，（选from—to—）确定后开始走样。可点击谱图进行观测，点时钟进行时时观测； 测样完成之后，先去电压（TQ Detector 中右下角圆圈），等源温度和脱溶气温度都降到100度以下时单击API去氮气。（注意：一定要先去电压，在去氮气）然后在mass console中将流量改为0； 冲洗色谱柱：根据测试过程流动相选择用不同比例的有机相/水相冲洗柱子，最后用纯有机流动相冲洗柱子至柱压降至最低； 设流速为零； 注意事项 每天进行测样前先点mass console进行Starts up system清洗； 测定完毕后将无机相溶剂滤头放入纯有机相瓶中； 更换柱子时注意：连接柱子之前要等管路有水出来后再进行； 调谐时注意：一定要先开气，再加压； 电脑不能关闭超过10分钟，否则仪器自动卸真空； 卸真空前不能关闭质谱电源及自动进样器电源； 用紫外检测器时要先开溶剂泵，20分钟左右之后打开紫外检测器电源； 测定前确保流动相足够； 实验前后都要填写仪器使用登记表，实验完成后填写仪器使用记录； 正确操作仪器，使用过程中如发现仪器出现异常情况，应及时与实验室管理人员联系； 要求用托盘盛放药品，避免药品直接放在实验台上，实验结束及时清洁实验台，带走所有实验试剂及样品； 仪器使用人员有义务打扫实验室卫生； 仪器使用人员有义务和责任负责实验室内实验仪器的安全； 仪器使用人员有义务和责任负责实验室内水、电安全；