反义IGF1基因治疗C6鼠脑胶质瘤的体内实验的研究.pdf

·脑肿瘤临床与研究· 核酶诱导神经母细胞瘤凋亡的实验研究 程远王世波冯涛 【摘要】 目的研究抗Bd一2mRNA的锤头型核酶(蜥bozyr础z)基因诱导神经母细胞瘤(sK_N一 鲫)凋亡以及增强化疗药物顺铂的敏感性。方法 (1)应用电穿孔法，分别将整合有抗Bcl_2mRNA 核酶的缺陷性逆转录病毒载体腓Iiz和空载体pDOR-r啪导人sK-N-sH细胞。(2)用免疫组化和间 接免疫荧光染色法观察Bd一2蛋白表达。(3)用流式细胞仪(阢M)检测细胞凋亡率及细胞周期的变 化。(4)电镜观察转染细胞形态变化。结果(1)转染RZ组Bd．2蛋白合成受到抑制，(2)细胞周 期显示，转染配组可见凋亡峰，发生G∥G期阻滞；电镜观察呈典型的凋亡形态改变。(3)顺铂增 敏试验表明顺铂对转Ilz组杀伤作用增强。结论逆转录病毒介导的抗Bd一2核酶基因可抑制肿瘤细胞 内Bd一2晋白的合成，促进瘤细胞凋亡，并可增强其对化疗药物顺铂的敏感性。 候量词】 核酶Bd．2化疗基因治疗 m印叩岫盎时m叫岫bt岫咖诅埘by血岬疆㈣‰，删鼢，倒G‰．脚- m鲥旷舳蚋胤昭町．如岛咖d锄‰脚肺^咖￡旷‰7唧哪。肘目i证d¨赫时，(胁增扣曙4【】0【)lo i眦one叭‰哪cdl 【Ah嘣】a咖嘶他11】口ou出椭nsductiIlga抽。巧me嘴血吼Bd-2 lir世(sH_N_ arIdthe catlbe sH)，切0b暇wwI捌耵h唧oeⅡ锄bei血bitedse嘣d诵ty0f睡N_sHceⅡ啪瑚fjrredt0ci耐撕n ven循w∞Ⅱ础c吲ir．t0nelⅡ枷asI伽【laceⅡbydec脚pma6伽．Byim- i呖e啤耐．M蛐口由pDoR—Rz瞅∞恤al i础rectim唧栅啪碓8cence Bd一2 田咖叼加掘唧aId dyei“grr·曲0ds，dlec}Iarl目∞0f8邛re8画叩we陀observed； 柚dlhe t0曲11出rredoeu啪8 e∞五6v姆0fci印mn qI】蚰曲edbyⅡⅡ划i6ed2，5·diPh即一碱mmb岫Ⅻde 0fBcL2 was 0fthe (Mrr)舶br证E—c鹧sayR髑I岫 (1)Ⅲ蛇syllt●瞄is p硪in irlhi陆ed；(2)tIle靶Ilsi6订ly oeⅡ_曲RZ Bd一2啪i山bite 0f t0吐甲hiⅡ啪s面期啪d．C哪由商。璐TlleIibo甲肿ge肿agmⅡn d屺叩n}瞄is 0f IIcL2口嘶n训nm叫掣ow山，irB陀够ethe鸵llsi6vityk咖【lEfapeuⅢ． Gem 【K叮栅】珩b0可Ⅱ砖Bd一20l州．0t}I删旰¨tamm啪py 对于中枢神经系统恶性肿瘤，手术难以全切， 一、材料 复发率高，而放疗低敏感性以及肿瘤细胞产生的多 药耐药是该类肿瘤治疗失败的主要原因。应用针对 物化学教研室构建并提供【3 原癌基因Bd．2进行的反义基因治疗已取得初步进 展L1，…。本实验以神经母细胞sK—N—sH为对象，将 带有抗Bcl-2mRNA的核酶基因的逆转录病毒载体 转入瘤细胞内，通过切割Bcl-2InRNA，观察Bcl-2 蛋白的表达，肿瘤细胞的凋亡以及对化疗药物顺铂 的敏感性，为探讨核酶治疗中枢神经系统恶性肿瘤 链为核酶的非模板链，皿链为核酶的模板链，两 提供一定的实验依据。 条链完全互补。大肠杆菌珊109由重庆医大肝研所 材料与方法