细胞工程综合版..docVIP

细胞工程原理 一、名词解释 1、生物工程：是以生命科学为基础，利用生物体系和工程原理生产生物制品和创造新物种的一门综合技术。 2、细胞工程：是指应用细胞生物学和分子生物学的方法，通过类似工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。 3、细胞全能性：是指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。 4、细胞多能性：有些细胞能分化出多种组织的潜能，却失去了发育成完整个体的潜能。 5、植物组织培养：是指在无菌的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞、胚胎、原生质体等培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，诱发产生愈伤、潜伏等，或者生长成新的完整植株的一种实验技术。 6、愈伤组织：脱分化后的细胞经过细胞分裂产生无组织结构、无明显极性的松散的细胞团，称之为愈伤组织。 7、继代培养：是愈伤组织在培养基上生长一段时间后，由于培养基枯竭、水分散失、并已积累了一些代谢产物，此时将组织继续转入新的培养基上培养。 8、胚状体：在培养过程中由外植体或愈伤组织产生的与正常受精卵发育的方式或类似的胚胎结构现象。 9、脱分化：已分化的细胞在一定因素作用下重新恢复分裂机能并改变原来的发展方向而沿着一条新的途径发育的过程。 10、再分化：脱分化的细胞团或组织经重新分化而变为具有未分化细胞特性的过程。消毒后，对外植体进行修剪、剪切，并接入培养基中培养条件一般控制在12小时光照，20±1。 细胞工程、生物工程、多能干细胞、继代培养、人工种子、看护培养、固定化培养、细胞两相培养、不对称融合、雄核发育。 二 填空 1 生物工程的六大组成：发酵工程、酶工程、蛋白质工程、基因工程、生物化学工程、细胞工程。 2 基因工程（DNA重组技术）的一般步骤：（1）目的基因的获得，（2）将目的基因与质粒重组，（3）将重组DNA引入到宿主细胞，（4）筛选能表达的目的基因。 3 细胞融合的方法，生物法：HVJ法；化学法：高Ca离子、高pH结合PEG诱导融合，NaNO3诱导；物理法：电融合法 病毒在植物体内的传播途径：通过维管系统和胞间连丝 5 动物细胞培养的传统方法：悬滴培养、灌注小室培养、转管培养、转瓶培养和培养板培养。 三 简答题 1、杂种细胞筛选方法：选择性培养基筛选法、遗传互补筛选法、抗性互补筛选法、利用物理特性筛选法、利用生长特性筛选法 2、有什么方法可以防止或缓解褐变？ 当外植体处于机械损伤等逆境时，细胞膜的结构遭到破坏，酚酶催化多酚类化合物，使其发生氧化形成棕褐色的醌类物质和水；醌类物质经过非酶促聚合，形成黑褐色物质（羟醌和黑色素等），引起褐变的发生。 解决途径：（1）选择适宜的外植体 （2）选择适宜的培养条件（低盐、低pH、低温、弱光照） （3）细胞筛选和材料预处理（黑暗条件下，5°C，12~14h） （4）使用抑制剂和吸附剂（抗坏血酸、PVP、少量活性炭等） （5）连续转移 3、胚状体同步发育方法及原理 （1）抑制剂法：在细胞培养初期加入细胞分裂抑制剂，去除抑制剂后细胞可同步发育。 （2）低温法：低温处理抑制细胞分裂，再恢复正常温度使细胞分裂同步化。 （3）渗透压法：不同发育时期的胚状体对渗透压的要求不同，用一定的渗透压使胚状体停止在某一阶段，然后再使其同步发育。 （4）通气法：细胞分裂旺盛时有大量气体（如乙烯）生成。可以通过在培养基中通入乙烯或氮气控制细胞同步分裂。 （5）分离筛选法：用不同孔径的筛网将不同发育时期的胚状体分离开来，也可以采用密度梯度离心法来选择不同发育时期的胚状体。 4、为什么用茎尖做外植体能培养出脱毒苗？ 茎尖培养脱毒的原理：病毒在感染植物上分布不一致，即在老叶片及成熟的组织和器官病毒含量较高，而幼嫩的及未成熟的组织和器官病毒含量较低，生长点（0.1~1mm区域）则几乎不含或很少。 茎尖（分生组织）无病毒可能存在的原因： （1）在一个植物体内，病毒易于通过维管系统而移动，但分生组织中不存在维管束系统。 （2）病毒在细胞间移动的另一个途径是胞间连丝，然而，它的速度很慢，难以追上活跃生长的茎间。分生组织分化速度大于病毒传播速度。 （3）在茎尖中存在高水平的内源生长素，可抑制病毒的增殖。 5、生物反应器存在的问题？ 植物细胞培养在放大培养时往往产量会比实验室摇瓶培养或小型反应器培养下降许多，次级代谢产物合成能力也会下降许多，可能是由于以下因素引起的： （1）通气和搅拌引起的流体压力易造成细胞损伤、有益气体的散失、大量泡沫的生成等，这些均会对细胞生长和产物积累产生影响。 （2）高密度引起培养液粘度增加，造成营养吸收、气体传递的抑制。 （3）反应器结构缺陷（如死角等）导致细胞黏附，引起细胞死亡、腐败以及营养和