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第四章RNA世界 对RNA的传统认识 RNA是真正重要的核苷酸DNA的一种一次性使用的拷贝。DNA是我们基因和染色体的原料，决定着我们的遗传特征，而RNA只是DNA指令的一个拷贝，是指导蛋白质合成的信使，在旅行职责后被催化分解。 The Nobel Prize in Chemistry 1989 RNA World hypothesis 1986，诺贝尔化学奖（ 1981）获得者 W. Gilbert提出“RNA世界”假说： “生命起源 之某时期，生命体仅由一种高分子化合物RNA组成。遗传信息传递建立于RNA的复制，复制机理与当今DNA复制机理相似，作为生物催化剂的、由基因编码的蛋白质还不存在”。The RNA World, Nature 319: 618 DNA拷贝出单链RNA，然后RNA被折叠成复杂的形状 。 RNA的特性 2’羟基——化学性质较DNA活跃，易突变，携带遗传信息能力不如DNA；组成没有蛋白质复杂——不如蛋白质结构多样，功能分子作用不如蛋白质；唯一既能携带遗传信息又可为功能分子的生物高分子化合物。 “RNA世界” 假说—— RNA是生命初期最关键的分子，后来当DNA和蛋白质的功能远远超过最初RNA的作用时，它才退到了次要地位。 一、核酶（Ribozyme）的发现 1982年， Cech等研究四膜虫rRNA时，发现RNA具有催化功能。区别于传统蛋白酶，Cech给这种具有催化活性的RNA 定名为核酶。 1983年Altman 等人在研究细菌RNase P时，发现tRNA分子前体的多余序列由RNA切除 。 1. 新生RNA的剪接和修饰 mRNA tRNA rRNA mRNA的剪接（mRNA splicing ） hnRNA /pre-mRNA 核内的初级mRNA称为杂化核RNA (hetero- nuclear RNA, hnRNA)，或mRNA前体（ pre- mRNA） 断裂基因(splite gene) 真核生物结构基因，由若干个编码区（coding region）和非编码区（non-coding region）互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因。 内含子的分类 根据基因的类型和剪接的方式，通常把内含子分为4类： I：主要存在于核、线粒体、叶绿体编码的rRNA、 mRNA、tRNA基因； II：真菌、藻类、植物之线粒体和叶绿体mRNA； III：是常见的形成套索结构后剪接（剪接体）， 大多数mRNA基因有此类内含子； IV：是tRNA基因及其初级转录产物中的内含子， 剪接过程需内切酶及ATP。 tRNA的转录后加工 rRNA的转录后加工 2.Cech小组的工作 四膜虫细胞中DNA转录成rRNA后，rRNA中一些无意义的序列，或“内含子”（intron），如何从RNA分子中剪切下来。 四膜虫：原生动物，含一种RNA，其组成中除了核糖体RNA外还有一个由414个核苷酸组成的插入序列（intervening sequenc，IVS） 发现：转录产物rRNA前体不稳定，在鸟苷和Mg2+存在下切除自身的413个核苷酸的内含子（IVS），使两个外显子拼接起来，变成成熟的rRNA分子。无蛋白质酶参加——自我剪接。 Cech的实验结论 IVS具有类似蛋白酶的功能，能够打断及重建磷酸二脂键。 相信rRNA前体能靠自己完成剪接过程。在一定条件下rRNA前体可以按一定方式盘绕，进而自己切割自己，以后再把保留rRNA部分的末端连接起来。即它是可以催化自由底物的具有酶活性的RNA。 RNA分子具有自身断裂的催化作用，以及酶活性的另一个重要方面即催化其他分子的反应。 3. Altman小组的工作 细菌t-RNA分子的剪接过程 。 发现：在较高浓度的镁离子和适量精氨酸参与下，核酸酶P（ribonuclease P， RNase P ）中的 RNA能够切割tRNA前体的5’端。 核酸酶P的催化作用是由RNA完成的，而其中的蛋白质在细胞内仅仅起稳定构象的作用。 二、核酶的作用机制 核酶作用的特点： 具有催化功能的RNA分子 大多通过催化转磷酸酯和磷酸二酯键水解反应参与RNA自身剪切、加工；有些具有RNA 连接酶、磷酸酶等活性。 底物可以是不同的分子, 亦可为同一RNA分子中的某些部位。 催化效率较蛋白质酶低。 核酶是一种金属依赖酶 金属离子的作用： 特异的结构作用——提供静电屏障，促进RNA的总体折叠，维持核酶三维结构稳定 参与活性部位的化学反应——二价金属离子（Mg 2+ ）与底物活性部位直接相互