In-fusion技术.ppt

引物设计及目的基因片段扩增 * * 引物的5’末端必须包含与载体末端相同的15个碱基序列 引物的3’末端必须包含与目的基因片段相互补的特异碱基序列 载体线性化 * * PCR扩增 酶切处理 In-Fusion连接反应 * * In-Fusion专利酶 线性化载体 目的基因片段 反应液 直接转化 In-Fusion 连接反应 50 ℃ 15 min 【结果】 Cloning Enhancer处理，37 ℃ 15 min， 80 ℃ 15 min 引物设计原则 引物的5’末端必须包含与载体末端相同的15个碱基序列 引物的3’末端必须包含与目的基因片段相互补的特异碱基序列 * * 引物设计原则 * * 引物设计网络工具 * * /infusion 在线支持工具 * * 主要内容 2 In-Fusion?优点及应用实例 3 In-Fusion?系列产品介绍 4 常见问答 1 In-Fusion?克隆技术的原理 产品列表 * * 基础款相关产品 * * 5X In-Fusion HD Enzyme Premix pUC19 Control Vector, linearized (50 ng / μl) 2 kb Control Insert (40 ng / μl) In-Fusion? HD Cloning Kit（ 639648/49/50) 组分 附带Cloning Enhancer的相关产品 * * Cloning Enhancer的作用： 消除PCR反应液中的引物二聚体和dNTP等的影响 无需对PCR产物进行胶纯化 操作简单 In-Fusion? HD Cloning Kit w/ Cloning Enhancer (639633/34/35) * * Up to 5X Higher Efficiency 未经处理 Cloning Enhancer处理 Cloning Enhancer的实用例 * * 主要内容 2 In-Fusion?优点及应用实例 3 In-Fusion?系列产品介绍 4 常见问答 1 In-Fusion?克隆技术的原理 In-Fusion Kit 常见问答 * * Q1.如何选择PCR酶？ A1.可以使用任何PCR酶。由于科研人员进行克隆表达的实验较多，我们推荐使用高保真的PCR酶。 Q2.载体和插入的DNA片段末端结构有限制吗？ A2.没有特别的限制。无论是平滑末端、粘性末端或者末端有无A尾均可 进行有效的连接反应。 Q3.载体和插入的DNA片段的长度有限制吗？ A3.没有特别的限制。载体和插入的DNA片段即使超过10 kb也可以进 行连接反应，只是连接效率会有所降低。插入的DNA片段只要不少 于50 bp就可进行有效的连接反应。 Q4.线性化载体末端是否需要进行去磷酸化处理？ A4.线性化载体末端磷酸基团的存在与否不会影响In-Fusion连接效率。 因此，不需要对线性化载体进行去磷酸化处理。 技术支持 * * ：800-810-6261；010/ 86 ： service@ ： 我们将竭诚为您服务！ Thank You ！ * * Title of the Presentation can go here ? Title of the Presentation can go here ? Title of the Presentation can go here ? ? Title of the Presentation can go here ? Title of the Presentation can go here ? Title of the Presentation can go here ? Title of the Presentation can go here ? Title of the Presentation can go here In-Fusion克隆技术介绍 * 宝日医生物技术（北京）有限公司 基因克隆背景简介 * * TA克隆 限制性酶切克隆 平滑末端克隆 缺点：连接效率低 耗时较长 需要特定限制性酶切位点 In-Fusion克隆产品 * * Clontech 专利 In-Fusion? HD Cloning System 任意载体 任意基因片段 这是一款让您随心所欲地实现基因定向克隆的产品！ In-Fusion?基因克隆特点 * 主要内容 * * 2 In-