β2-肾上腺素受体的高活性固定化方法的研究.pdfVIP

全国生物医药色谱学术交流会(2010)论文集 C191312一肾上腺素受体的高活性固定化方法研究 3271茂1幸 何嫒1苏华1郑晓晖2 1西北大学化学与材料科学学院，西安710069；2西北大学生命科学学院，西安710069 在小分子药物与生物大分子相互作用的亲和色谱研究方法中，由于随意固定化生物大分 子的生物活性低、稳定性差，因而，能保持生物大分子活性的定向固定化方法研究已成为发 展趋势。屈．AR是G蛋白偶联的7次跨膜受体蛋白家族的成员之一，是常用止咳平喘药物发 挥药效的主要靶体。在前文研究中，我们建立了屈一AR为配体的生物亲合色谱法，用于中药中 与尼．AR有作用活性成分的筛选【l】。但是，屈。AR固定相的制备采用随意固定化方法。本文根 据尼．AR分子结构中N．糖基化位点远离其活性位点的结构特点，将其定向固定在色谱柱上， 以期提高受体的活性和稳定性。 研究方法为：按文献方法采用沙丁胺醇亲和树脂层析法从家兔肺组织中纯化出,82-AR[21。 采用氨丙基硅胶与羰基二咪唑反应，再与尼．AR洗脱液反应制备随意固定化屁．AR；用高碘酸 将尼-AR氧化后，再与氨丙基硅胶反应，制备固定化皮．AR固定相，最后比较两种固定相的 稳定性和活性。 。 表1是用BCA法测定两种固定相上仍．AR的含量。可发现，每克色谱填料上的受体键合 量定向固定化尼-AR色谱柱明显大于随意固定化尼-AR色谱柱，说明定向固定化屉．AR的键 合路线可提高色谱柱上尾．AR含量。 表1．色谱柱上尼一AR的含量对比 用与尼一AR有特异性作用的工具药硫酸沙丁胺醇、普萘洛尔和硫酸特步他林验证固定 仍-AR的活性。三种药物在定向固定尼·AR色谱柱上的保留时间均大于随意固定／，z-AR色谱柱 上的保留时间，说明药物与屁-AR结合作用较强，这与定向固定尼-AR色谱柱上受体键合量 较多有关。 用前沿色谱法测定普萘洛尔在定向固定应一AR色谱柱和随意固定皮-AR色谱柱上的饱和 吸附量吼以及相关参数(表2)·对比了普萘洛尔在两个色谱柱上的每毫克仍．AR所结合普萘洛 ’E-mail：ymwei@,nwu．eAu．cn 资助项目 全国生物医药色谱学术交流会(2010)论文集 尔量、每克填料上所结合的普萘洛尔量，发现随着时间段的变化，定向固定皮一AR色谱柱的 稳定性较好，且活性较高于随意固定尼-AR色谱柱。上述结果说明，本文建立的定向固定化 键合方法可提高仍．AR的稳定性和活性，这一方法对于研究屈-AR与其特异性药物的结合具 有重要意义。 表2．两个色谱柱与普萘洛尔结合量对比 参考文献t 【l】郑晓晖，赵新锋，杨荣，科学通报．2007，52(18)，2111-2115 【2】吕宝彰，卢建，安明榜．受体学．合肥：安徽科学技术出版社，2000，236．239