多维集成化蛋白质分离鉴定平台.pdfVIP

2010年微纳尺度分离和分析技术学术会议暨第六届全国微全分析学术会议 多维集成化蛋白质分离鉴定平台 袁辉明，张丽华， 徐茂兰， 梁振，张玉奎 中科院大连化学物理研究所，中科院分离分析重点实验室，国家色谱研究分析中心 随着蛋白质组学研究的不断深入，蛋白质的高通量、高分辨和高灵敏的分离鉴定技术得 到了广泛关注。在以质谱测序为基础的蛋白质组学分析方法中，传统基于蛋白质分离、蛋白 质酶解和多肽分离的分析策略多采用离线模式进行，存在着样品易丢失或污染、分析时间长 以及难以实现自动化等问题。因此，发展一种集蛋白质分离、在线酶解、多肽分离、质谱鉴 定于一体的全自动蛋白质分析平台是非常必要的。 近期我们发展了一种基于多维集成化蛋白质分离鉴定平台。如图 1 所示，蛋白质先通过 体积排阻色谱柱（4.6mm i.d×150mm ）预分级，并按一定的时间间隔 (15 min) 依次切入反 相色谱微柱 (0.3 mm i.d ×150 mm) 中进行进一步的分离。洗脱产物按时间间隔（每个馏分140 min ）依次通过中空纤维膜接口 (0.2 mm i.d×65 mm)去除有机溶剂，并进入固定化酶反应器 (0.25 mm i.d ×40 mm) 进行在线酶解。酶解产物被依次捕集在C18 预柱上，并通过微柱反相 色谱-质谱系统进行分离鉴定。将该平台应用于鼠脑提取蛋白质的分析。结果表明，在21 h 内，可以出2014 个蛋白质（鉴定效率为95 个/h ），系统峰容量高达7500 。 图1 SEC- μRPLC-膜接口-IMER- μRPLC-ESI-MS/MS 平台示意图 参考文献 2010年微纳尺度分离和分析技术学术会议暨第六届全国微全分析学术会议 [1] Yuan H.M., Zhang, L.H., Hou, C.Y., Zhu, G.J., Tao, D.Y., Liang, Z., Zhang, Y.K. Integrated platform for proteome analysis with combination of protein and peptide separation via on-line digestion. Anal.Chem . 2009, 81, 8708-8714. [2] Yuan H.M., Zhou Y., Zhang L.H., Liang Z., Zhang Y.K. Integrated protein analysis platform based on column switch recycling size exclusion chromatography, microenzymatic reactor and μRPLC-ESI-MS/MS. J. Chromatogr.A. 2009, 1216, 7478-7482. [3] Jin, W.H., Dai, J., Li, S.J., Xia, Q.C., Zou, H.F., Zeng, R. Human plasma proteome analysis by multidimensional chromatography prefractionation and linear ion trap mass spectrometry identification. J.Proteome.Res . 2005, 4, 613-619.