殊异韦荣菌中乳酸脱氢酶重组蛋白表达、纯化及活性分析.pdfVIP

生堡旦膣匡堂盘查!!!!生!旦箜兰!鲞擅型!鱼!!』!!!里!塑!：坠e!!竺!竺!!!!：!!!：!!塾PP!：! ·63· ．牙体牙髓病学研究． 殊异韦荣菌中乳酸脱氢酶重组蛋白的表达、 纯化及活性分析 何钟勤钟丞 高心 薛莹 孙晓宇 刘晓红 【摘要】 目的 进一步测定殊异韦荣菌中依赖性乳酸脱氢酶(1actate dehydrogenase，LDH)的活 性，以期为研究该酶的具体功能及作用机制奠定基础，并为龋病预防和治疗提供新的思路。方法重 组质粒转人大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中，采用不同时间及6种不同浓度的异丙基硫代一B． D一半乳糖苷(isopropyhhio—p—D—galactoside，IPTG)诱导乳酸脱氢酶蛋白表达，选择最佳条件诱导LDH 蛋白表达。并经His一标记蛋白纯化柱(HisTRAP FF柱)提纯，用LDH活性试剂盒测定蛋白活性。 结果pET-28a—LDH转入BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳显示 最适表达条件分别为IPTG终浓度0．4mmol／L、30℃诱导8h，IPTG终浓度0．4mmol／L、30。C诱导 6ho经BandScan 5．0软件分析，pET一28a—LDH质粒转化BL2I(DE3)表达相对含量为9．0％，高于 Rosetta(DE3)的6。1％；LDH活性试剂盒测定的蛋白活性值为13。79。结论本项研究获得了LDH 蛋白的最适诱导条件，并测出殊异韦荣菌中依赖性LDH的活性，为进一步研究LDH的功能及在龋病 防治中的作用奠定了基础。 【关键词】 韦荣球菌属；乳酸脱氢酶类；重组表达； 蛋白纯化 Therecombinant and oflactate inVeilloneila expression，purificationactivityanalysis dehydrogenase HE Xin dispar Zhong—qin，ZHONGCheng，GAO4，XUEYing，SUNXiao—yu，UUXiao—hong． ofEndodontics，School 130021，China +Department ofStomatology，JilinUniversity，Changchun author：GAO Corresponding Xin，EmaiZ：ymny870@163．corn，TeZ：0086-431 Todetermine lactate inVeiUonella 【Abstract】Objective dependencedehydrogenaseactivity Transformedtherecombinant in BL21(DE3)and1． d括par．Methods plasmidpET-28a—LDH Rosetta(DE3 Recombinantlactate f WaSinducedatdifferentconditions．Inductioncondition dehydrogenaseLDH)protein was toobtain ofrecombinant HisTRAPFF optimized properyield protein．Afterpurificationby column，the wasdeterminedwithLDHreactivekit．ResultsSodium gel proteinactivity dodecyls