两种鸭源致病型呼肠孤病毒病病原学特性分析.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会论文集 两种鸭源致病型呼肠孤病毒病的病原学特性分析 陈仕龙，陈少莺，林锋强，王 劭，程晓霞，朱小丽，李兆龙 (福建农业科学院畜牧兽医研究所，福建福州350013) 摘要：本研究旨在研究2种不同疾病型鸭源呼肠孤病毒的病原学特性差异。通过病毒的电镜形态、血清交 叉中和试验、病毒的细胞培养特性、病毒基因组特征及部分基因序列分析对两病毒进行了分析和比较。NDRV在 不同疾病型的水禽呼肠孤MDRV和NDRV之间的病原学特性差异较大。 关键词：番鸭呼肠孤病毒；新型鸭呼肠孤病毒；病原学特性；交叉中和试验；细胞病变 近年来，我国水禽的呼肠孤病毒感染不断发 (MDRV 生，并逐渐呈流行趋势，严重影响了水禽业的健康 (NDRVNP01)由本研究室分离、鉴定和保存。麻 发展。1997年以来发生在番鸭以软脚、拉稀、肝白 色坏死为主的番鸭肝白点病，其病原是番鸭呼肠孤 duck 制。 病毒(Muscovyreovirus，MDRV)【1]。2005年 LS 以来流行于多品种鸭，以肝、脾、心、法氏囊多器 1．3试剂和载体TriZol 官出血／坏死的鸭出血坏死性肝炎，其病原为新型 DNA聚合 M．MLV购自Gibco公司(美国)，rTaq duck reovirus，NDRV)[2-31。 鸭呼肠孤病毒(Novel 这两种水禽呼肠孤病毒病无论从流行病学、临床症 司；胶回收试剂盒购自上海华舜生物工程公司。 状和病理变化等存在较大差异。本研究从病毒的电 镜形态、细胞培养特性、血清学关系、及部分基因 制备超薄切片，醋酸铀．柠檬酸铅染色，透射电镜 观察。同时取胚尿囊液毒以9000r／min于4℃离心 序列分析等方面对MDRV和NDRV进行了病原学 000r／min 特性分析，为进一步研究禽类呼肠孤病毒的演化规 50min，取上清45 4℃离心120min，取沉 律奠定基础，也为水禽呼肠孤病毒病的有效防制提 淀溶于少量PBS中，即为分离毒差离样品，用磷钨 供技术支撑。 酸负染后，透射电镜观察。 1．5病毒TGID∞效价测定及血清的交叉中和试验 1材料和方法 分别将MDRV9710及NDRVNP03在CEF中培养 增殖，待病毒病变达75％以上时收获并冻融3次， 6000 1．1 禽胚与细胞1l～12日龄番鸭胚来自福州山 r．min．1离心10min，细胞毒上清分装保存供 区健康番鸭场；9日龄SPF鸡胚由福州大北农有限TClD∞测定和中和试验用。取细胞毒按10倍系列稀 释后，分别接种CEF单层细胞每孔20“L，每个稀 公司提供；番鸭胚成纤维细胞(MDEF)和鸡胚成 释度重复4孔。逐日观察细胞病变至7d，按 纤维细胞(CEF)的制备按殷震法进行㈣；传代细胞 T、Marcl45、VERO、ST、MDCK等引自 系AD293 中国兽医药品监察所并由本研究室按常规方法传代