HPLC快速测定红肠中胭脂红的含量.pdfVIP

LC．Oll HPLc快速测定红肠中胭脂红的含量 陈惠兰 唐雪琴 (江苏商检局 南京210001) 1前言 胭脂红作为食品着色剂已广泛地用于食品加工业中，出口红肠中就添加了一定量的胭 脂红。它可以改变食品的外观，增进人们的食欲，但过量摄入胭脂红，会损害人们的身体 健康。国家标准GB2760．86中对食品中胭脂红含量作了规定，不能超过0．05眺g，进口国 对此也有一定的要求。因此，有必要建立一个快速、准确的测定食品中胭脂红的方法，以 便指导生产及满足出口商品的检验要求。 目前，国内测定食品中胭脂红的方法有：示波极谱法、分光光度法、吸附伏安法、Pvc 膜电极法、一阶导数光谱法等，但采用液相色谱法测定食品中胭腊红含量未见报道。本文 研究了采用液相色谱法测定红肠中胭脂红的含量。该法的关键在于必须选择合适的样品前 处理方法和色谱条件，使被测物与杂质分离开。我们用反相液相色谱系统来分离胭脂红， 并采用微量化学法作为样品前处理方法，使整个分析过程快速、简便、定量准确。本方法 的回收率为83．4％曲9．2％．变异系数为3．7％，测定低限为2．5m刚Icg。 2实验部分 2，1仪器 高效液相色谱仪：HPl090M配DAD检测器：旋涡混匀器；离心机；标准磨口具塞 离心管；旋转蒸发器。 2．2试剂 本实验所用试剂均为分析纯，水为重蒸水。 胭脂红标准溶液：准确称取0．050 09胭脂红，用水溶解并定容至50IIlL，制成贮备液， 使用时再稀释至适当浓度。 2．3样品前处理 称取2．09样品于50mL具塞离心管中，加lOmL乙醚，混匀1min，去掉乙醚。重复 000“IIlin离心5min，上清液 1次，加入lOmL5％氨·乙醇(70％乙醇：浓氨水=95：57)，4 5％氮·乙醇提取胭脂红，反复多次，直至提取完全，合并提取 移入鸡心瓶中。再以5mL 液．以3mol，L盐酸调pH至中性，在55℃水浴上将提取液浓缩至5mL左右，移入10mL 离心管中，用3m01，L盐酸调pH至3~4。加0．39聚酰胺，混匀2min离心，去掉上清液。 34)洗2次，再用1mL5％氨·乙醇解吸聚酰胺胭脂红，解吸 用5mL70℃酸化的水(pH um滤膜过滤，滤 液吸至10mL容量瓶中。以3mol几盐到调pH至8，用水定容，用O．45 液供HPLc测定。 2．4色谱测定 ODs200mm×4．6mm (1)色谱条件：色谱柱Hypersil i．d．；流动相： 一44- 矿(cH30H)：矿(0．02mol／L 进样量：10“L；柱温：室温。 (z)色谱测定：根据样液中胭脂红含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作 溶液和样液中胭腊红的响应值均应在仪器的检测线性范围内，在上述色谱条件下．胭脂红 保留时间约为7．5min。 3结果与讨论 3．1样品前处理方法的选择 (1)提取溶剂的选择． 本实验分别选择l％氨水、70％乙醇：氨=99：l、95％乙醇：氨=99：1、丙酮、1mo儿盐 酸作为提取液，从同体积提取1次的样液颜色看，70％乙醇：氨=99：1颜色最深。又以同 体积的70％乙醇：氨=99：l、97：3、95：5、90：IO分别提取样品1次，所测得的胭脂红的峰 面积如下： 由此可见，70％乙醇：氨=95：5是最为理想的提取溶剂。 (2)净化方法的选择 本实验分别选用Sep-palcC。。小柱和聚酰胺进行样品净化。实验结果表明：胭脂红在 c。小柱上不保留，过柱后的溶液混浊，达不到净化目的，聚酰胺能吸附胭脂红， se呻ak 能去掉部分水溶性杂质。 (3)解吸溶剂的选择 参照GB9695．6·88。用l％氨·乙醇作为解吸剂，解吸次数多，解吸效果不理想，实 验中发现，增加氨的浓度，能提高解