RP-HPLC法测定四季三黄胶囊剂中大黄酸的含量.pdfVIP

LC．065 RP—HPLC法测定四季三黄胶囊剂中大黄酸的含量 刘放陈爱瑛 (浙江省医学科学院药物研究所杭州310013) 1前言 大黄系常用中药材，化学成分较复杂，蒽醌类衍生物为大黄中重要活性成分，它们的 化学结构或存在状态不同(游离或结合)，其药理药效差异较大．结合型大黄酸是正品大黄 的主要特征之一。目前，测定大黄酸的方法主要有薄层扫描法…和高效液相色谱法M。本 文采用反相高效液相色谱法测定四季三黄胶囊中大黄酸的含量，获得了满意的结果。 2方法与结果 2．1仪器与试药 shimadzu LC-6A高效液相色谱仪系统，Shimadm uv．2100紫外分光光度计：甲醇(色 谱纯，上海吴泾化工厂)，其余试剂均为分析纯：大黄酸对照品(中国药品生物制品检定所)． 四季三黄胶囊(浙江省中药研究所)。 2．2大黄酸紫外吸收光谱测定 精确称取大黄酸对照品适量，加甲醇制成约20mg／L的溶液，以甲醇为空白，在 200吨80m进行扫描，结果见图1． 2．3色谱条件 i．d．×150mm，5 色谱柱为spkerisorbclI(3．9mm pm)。流动相y(甲醇)：矿(水)：y(醋 0_016Au盎，进样量lOuL。 2．4标准曲线绘制 精确称取大黄酸对照品适量，加甲醇制成50mg儿的溶液作为对照品溶液；精确量取 对照昂溶液2．0。5．O，lO．O，15．O，20．OuL，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定 峰面积。以大黄酸进样量为横坐标，相应的蜂面积积分值为纵坐标作图，其回{扫方程为 r-177619品46064，，；0．9993，表明大黄酸进样量在0．1～1．oug范围内呈线性关系。 2．5精密度考察 ? + 1 精确量取匕述大黄酸对照品溶液，重复进样5次，测得峰面积积分值胁1．23％。 取同一对照溶液于同日内不同时间分别进样测定，求得日内麟D=1．86％(F5)，同法求得 日间RsD=2．74％(=5)。 · 2．6加样回收试验 取已准确测知大黄酸含量的四季三黄胶囊适量．分*U添加一定量的大黄酸对照品，按 照“供试品溶液制各与含量测定”项下操作并进行测定。经计算求出供试品加样回收率， 结果供试品总大黄平均加样回收率为93．39％，RsD=1．37％；结合型大黄酸平均加样回收 率为97．53％，R，D=1．79％。 ． ．156． 27供试品溶液制备与舍量测定 取四季三黄胶囊lg，精确称定，置索氏提取器中．加氯仿150mL．放置过夜。水浴 回流提取至上清液无色，过滤，回收溶剂至干，加甲醇溶解并定量转移至25mL量瓶中， 用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试液A(供测游离型大黄酸)：将经索氏提取后的残渣烘 HcI 干，置圆底烧瓶中，加2mol，L10IIlL，回流2．5h，加入10mL氯仿回流0．5h，再加入 10mL氯仿，重复1次，分取氯仿层，并用氯仿10mL洗水层2次，合并氯仿液，回收氯 仿至干，用甲醇转移定容至25mL，作为供试液B(供测结合型大黄酸)。分别量取上述供 试液A、B各10 uL，注入液相色谱仪，测定峰面积：再取大黄酸对照品溶液，同法进行 测定，按外标法以峰面积计算供试品中大黄酸含量。结果列于表1和图2。 图1大黄酸Uv吸收图谱 图2对照品和供试品讹咿Lc图谱 a．大黄酸。b．四季三黄胶囊。c．空白对照． 1．大黄酸． 表1 四季三黄胶囊大黄酸含量测定结果(庐3) …． 总大黄酸 结合型大黄酸 游离型大黄酸 }比’于：=?———————————————=：————————