微生物菌种的筛选与保藏.pdf

微生物学 刘光磊 liugl@ouc.edu.cn College of Marine Life Sciences, Ocean University of China 第六章微生物菌种的筛 选与保藏  本章要点  如何按目的要求筛选菌株  微生物菌种保藏方法  了解国内外各大菌种保藏机构 种 ≠ 菌株 （speci （strain ） es ） 第一节从自然界中分离筛选菌种  生产菌株来源  1、索取或购买  2、自己选育  (1) 用原有菌株进行遗传改造进行育种  ① 诱变育种  ② 基因重组育种  (2) 向菌种保藏机构索取、购买出发菌株进行选育  (3) 从自然界中分离菌种  从 自然界中分离菌种就是从自然界微生物资源中 有目的、快速、准确地选出所需要的菌种。  从自然界中分离筛选菌种的一般步骤  筛选目标→设计方案 采样 增殖培养 平板分离 性能考察(生 筛选(初筛、 单株纯种分 产性能试验、 复筛) 离 菌种鉴定）  一、采样  从 自然界种采集含目的菌的样品  1. 环境条件对土样本中微生物分布的影响  （1）营养环境 ①高糖环境（加工蜜饯、糖果、蜂蜜的环境）土壤 中：耐渗透压酵母，柠檬能产生菌，氨基能产生菌； ②富含淀粉环境污泥、水沟旁土壤中：淀粉酶产生 菌； ③森林中腐叶烂草下土壤：纤维素酶产生菌； ④含蛋白质（蚕丝、豆饼、生皮晒厂）土壤中：蛋 白酶产生菌； ⑤油田土：石油分解菌 ；  （2）水分 ①离地表5- 15cm土样 ②含水过多、过少都不理想  （3）温度：采样以秋季为好  （4）通风  （5）酸碱度： 细菌、放线菌：中性或偏碱； 霉菌、酵母：偏酸  2 .采样方法  （1）去除表层土  （2）取5- 15cm土样几十克，装入无菌牛皮低袋或逆 料袋中  （3）植物根、茎、叶、花、果实。  3 注意  记录：时间，地点，环境情况等  样品袋应封好口，防止水分失去  土样应在分离前破碎  尽快分离  红树林  二. 增殖培养（富集培养）  适用：样品中目的菌数量不够多时  目的：提高样品中目的菌的数量和比例  原理：通过控制营养成分或培养条件，使目的菌得 以繁殖和/或非目的菌的生长受到抑制  4. 方法  （1）控制营养成分 ① 纤维素为唯一碳源，可增殖分解纤维素的菌 ② 可溶性淀粉为唯一碳源，可增殖产淀粉酶的菌种 ③ 酒精废水，可以增殖废水利用菌  * 多种微生物所利用的碳源、氮源不能作控制因素  （2）控制培养基pH 细菌、放线菌：中性偏碱，真菌：偏酸 但非目的菌的生长不能被